| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第8-11页 |
| 1.1 引言 | 第8页 |
| 1.2 植物转录因子 | 第8页 |
| 1.3 ERF转录因子 | 第8-10页 |
| 1.3.1 ERF转录因子分类 | 第9页 |
| 1.3.2 ERF转录因子的功能 | 第9-10页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第10-11页 |
| 2 拟南芥应答盐胁迫ERF基因的鉴定 | 第11-17页 |
| 2.1 实验材料 | 第11页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第11页 |
| 2.1.2 植物材料培养及处理 | 第11页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第11页 |
| 2.2 实验方法 | 第11-13页 |
| 2.2.1 拟南芥总RNA的提取 | 第11-12页 |
| 2.2.2 拟南芥cDNA的合成 | 第12页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR | 第12-13页 |
| 2.3 结果分析 | 第13-16页 |
| 2.3.1 拟南芥ERF转录因子生物信息学分析 | 第13-14页 |
| 2.3.2 拟南芥ERF基因应答盐胁迫的表达分析 | 第14-16页 |
| 2.4 本章小结 | 第16-17页 |
| 3 拟南芥ERF基因家族应答非生物胁迫表达模式分析 | 第17-23页 |
| 3.1 实验材料 | 第17页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 3.1.2 植物材料处理 | 第17页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第17页 |
| 3.2 实验方法 | 第17-19页 |
| 3.2.1 拟南芥总RNA提取 | 第17页 |
| 3.2.2 拟南芥cDNA合成 | 第17页 |
| 3.2.3 实时荧光定量PCR | 第17-19页 |
| 3.2.4 拟南芥RNA测序及统计分析 | 第19页 |
| 3.3 结果分析 | 第19-21页 |
| 3.3.1 拟南芥ERF基因在不同胁迫条件下差异表达分析 | 第19-20页 |
| 3.3.2 基于RNA测序的ERF基因表达模式分析 | 第20-21页 |
| 3.4 本章小结 | 第21-23页 |
| 4 AtERF | 第23-32页 |
| 4.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 4.1.2 试剂(盒) | 第23页 |
| 4.1.3 载体及菌种 | 第23页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第23-24页 |
| 4.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 4.2.1 拟南芥总RNA的提取及cDNA合成 | 第24页 |
| 4.2.2 引物设计及合成 | 第24页 |
| 4.2.3 基因克隆与pMD19-T载体连接 | 第24-26页 |
| 4.2.3.1 目的基因cDNA片段克隆 | 第24页 |
| 4.2.3.2 目的条带回收 | 第24-25页 |
| 4.2.3.3 pMD19-T连接 | 第25页 |
| 4.2.3.4 热激法转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| 4.2.3.5 阳性克隆的鉴定 | 第26页 |
| 4.2.4 构建植物表达载体 | 第26-30页 |
| 4.2.4.1 质粒提取 | 第26-27页 |
| 4.2.4.2 酶切引物设计及合成 | 第27页 |
| 4.2.4.3 目的基因引入酶切位点 | 第27-28页 |
| 4.2.4.4 提取pBI 121质粒 | 第28页 |
| 4.2.4.5 双酶切反应 | 第28页 |
| 4.2.4.6 纯化反应 | 第28页 |
| 4.2.4.7 载体连接 | 第28-29页 |
| 4.2.4.8 连接热激法转化大肠杆菌与检测 | 第29页 |
| 4.2.4.9 农杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 4.2.4.10 电击法转化农杆菌 | 第29-30页 |
| 4.3 结果与分析 | 第30-31页 |
| 4.3.1 植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 4.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 5 AtERF | 第32-47页 |
| 5.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第32页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 5.1.3 溶液配制 | 第32-33页 |
| 5.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 5.2.1 浸花侵染法转化拟南芥与转基因拟南芥的筛选 | 第33-34页 |
| 5.2.1.1 野生型拟南芥的培养 | 第33页 |
| 5.2.1.2 拟南芥浸花侵染 | 第33-34页 |
| 5.2.1.3 转基因拟南芥的筛选 | 第34页 |
| 5.2.2 转基因拟南芥非生物胁迫条件下抗逆性分析 | 第34-37页 |
| 5.2.2.1 非生物胁迫条件下拟南芥萌发能力分析 | 第34-35页 |
| 5.2.2.2 非生物胁迫条件下拟南芥根长及鲜重测定 | 第35页 |
| 5.2.2.3 非生物胁迫条件下拟南芥组织化学染色分析 | 第35页 |
| 5.2.2.3.1 二氨基联苯胺(DAB)组织染色 | 第35页 |
| 5.2.2.3.2 氮蓝四唑(NBT)组织染色 | 第35页 |
| 5.2.2.4 非生物胁迫条件下拟南芥生理指标测定 | 第35-37页 |
| 5.2.2.4.1 MDA含量测定 | 第35-36页 |
| 5.2.2.4.2 SOD活性测定 | 第36页 |
| 5.2.2.4.3 POD活性测定 | 第36-37页 |
| 5.2.2.4.4 叶绿素含量测定 | 第37页 |
| 5.3 结果与分析 | 第37-46页 |
| 5.3.1 转基因拟南芥PCR检测 | 第37-38页 |
| 5.3.2 转基因拟南芥萌发率分析 | 第38-39页 |
| 5.3.3 转基因拟南芥根长及鲜重测定 | 第39-41页 |
| 5.3.4 转基因拟南芥非生物胁迫条件下组织化学染色分析 | 第41-43页 |
| 5.3.4.1 二氨基联苯胺(DAB)组织染色 | 第41-42页 |
| 5.3.4.2 氮蓝四唑(NBT)组织染色 | 第42-43页 |
| 5.3.5 非生物胁迫条件下拟南芥生理指标测定 | 第43-46页 |
| 5.3.5.1 MDA含量测定 | 第43-44页 |
| 5.3.5.2 SOD活性测定 | 第44页 |
| 5.3.5.3 POD活性测定 | 第44-45页 |
| 5.3.5.4 叶绿素含量测定 | 第45-46页 |
| 5.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
