| 中文摘要 | 第14-16页 |
| ABSTRACT | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-28页 |
| 1.1 细胞周期概述 | 第19-20页 |
| 1.1.1 细胞周期 | 第19页 |
| 1.1.2 细胞周期检验点 | 第19-20页 |
| 1.2 周期蛋白的结构与功能 | 第20-25页 |
| 1.2.1 周期蛋白的发现和分类 | 第20-21页 |
| 1.2.2 周期蛋白的结构 | 第21-22页 |
| 1.2.3 周期蛋白功能 | 第22-25页 |
| 1.2.3.1 Cyclin A调控DNA复制和细胞分裂期的进入 | 第22页 |
| 1.2.3.2 CyclinB参与细胞分裂期的进程 | 第22-23页 |
| 1.2.3.3 CyclinD调控细胞周期G1/S期的转化 | 第23-24页 |
| 1.2.3.4 CyclinE是G1/S期的转化的限制性因素 | 第24-25页 |
| 1.3 模式动物---嗜热四膜虫 | 第25-26页 |
| 1.4 本课题的研究意义 | 第26-28页 |
| 第二章 嗜热四膜虫中CYC28基因生物信息学分析 | 第28-36页 |
| 2.1 材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 细胞株和菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂和工具酶 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验所用引物 | 第29页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.2.1 嗜热四膜虫全基因组的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 嗜热四膜虫总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.3 嗜热四膜虫细胞的培养和饥饿 | 第30页 |
| 2.2.4 嗜热四膜虫cDNA的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.5 野生型嗜热四膜虫CYC28基因的实时荧光定量分析 | 第31-32页 |
| 2.2.6 实时荧光定量数据处理 | 第32页 |
| 2.2.7 野生型嗜热四膜虫CYC28基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.3 结果 | 第33-35页 |
| 2.3.1 CYC28基因序列的扩增 | 第33页 |
| 2.3.2 CYC28基因的表达谱 | 第33-34页 |
| 2.3.3 Cyc28序列的分析 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 周期蛋白Cyc28在嗜热四膜虫的定位分析 | 第36-48页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 细胞株和质粒 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂和工具酶 | 第36页 |
| 3.1.3 实验所需引物 | 第36-37页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第37页 |
| 3.2 主要实验方法 | 第37-43页 |
| 3.2.1 嗜热四膜虫的培养 | 第37页 |
| 3.2.2 过表达重组质粒pXS-CYC28的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.3 pXS75-CYC28重组质粒转化野生型嗜热四膜虫 | 第39-40页 |
| 3.2.4 突变细胞株筛选 | 第40-41页 |
| 3.2.5 间接免疫荧光定位 | 第41页 |
| 3.2.6 蛋白免疫检测 | 第41-43页 |
| 3.3 结果 | 第43-46页 |
| 3.3.1 过表达重组质粒pXS75-CYC28的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.2 过表达株HA-CYC28-B和HA-CYC28-C的重组鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 Cyc28在四膜虫有性生殖过程早期定位于细胞质，后期定位在旧大核 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 嗜热四膜虫CYC28基因的敲除及功能分析 | 第48-57页 |
| 4.1 材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 细胞株和菌株 | 第48页 |
| 4.1.2 主要试剂和工具酶 | 第48页 |
| 4.1.3 实验所用引物 | 第48-49页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 4.2.1 四膜虫的培养和饥饿 | 第49页 |
| 4.2.2 CYC28敲除载体的构建 | 第49-51页 |
| 4.2.3 CYC28干扰载体的构建 | 第51-52页 |
| 4.2.4 CYC28敲除载体和干扰载体转化四膜虫 | 第52页 |
| 4.2.5 四膜虫RNA的提取 | 第52页 |
| 4.2.6 四膜虫有性生殖过程核发育的检测 | 第52-53页 |
| 4.3 结果 | 第53-55页 |
| 4.3.1 CYC28敲除载体的鉴定 | 第53页 |
| 4.3.2 CYC28干扰载体的鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.3 敲减CYC28对有性生殖进程无显著影响 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 过量表达Cyc28对嗜热四膜虫有性生殖过程的影响 | 第57-60页 |
| 5.1 材料 | 第57页 |
| 5.1.1 细胞株和菌株 | 第57页 |
| 5.1.2 主要试剂和工具酶 | 第57页 |
| 5.1.3 实验所用引物 | 第57页 |
| 5.1.4 主要试剂的配制 | 第57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-58页 |
| 5.2.1 四膜虫的培养和饥饿 | 第57页 |
| 5.2.2 过表达载体的构建和转化四膜虫 | 第57页 |
| 5.2.3 四膜虫RNA的提取 | 第57页 |
| 5.2.4 实时荧光定量及数据分析 | 第57页 |
| 5.2.5 核发育的检测 | 第57-58页 |
| 5.3 结果 | 第58-59页 |
| 5.3.1 Cd~(2+)诱导了CYC28基因的过量表达 | 第58页 |
| 5.3.2 过量表达Cyc28影响四膜虫有性生殖过程中原核的有丝分裂 | 第58-59页 |
| 5.4 讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 总结与展望 | 第65-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 个人简况及联系方式 | 第73-74页 |
