| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 泛素-蛋白酶体径简介 | 第10-15页 |
| 1.1.1 泛素-蛋白酶体途径的定义 | 第10-11页 |
| 1.1.2 泛素化途径的组成 | 第11-13页 |
| 1.1.3 泛素-蛋白酶体途径的主要功能 | 第13-15页 |
| 1.1.3.1 参与DNA损伤修复 | 第13-14页 |
| 1.1.3.2 参与信号转导 | 第14页 |
| 1.1.3.3 参与转录调节 | 第14页 |
| 1.1.3.4 参与细胞周期调控 | 第14页 |
| 1.1.3.5 参与细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 1.1.3.6 参与疾病反应 | 第15页 |
| 1.2 泛素连接酶E3的结构与主要生物学功能 | 第15-17页 |
| 1.2.1 HECT结构域的泛素连接酶 | 第15-16页 |
| 1.2.2 RING结构域的泛素连接酶 | 第16-17页 |
| 1.2.3 U-box结构域的泛素连接酶 | 第17页 |
| 1.3 泛素化途径在无脊椎动物中的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的主要目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第19-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 实验菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.5 引物信息 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-38页 |
| 2.2.1 长牡蛎未处理样品收集 | 第21-22页 |
| 2.2.2 长牡蛎免疫刺激实验及样品收集 | 第22页 |
| 2.2.3 长牡蛎总RNA提取及cDNA合成 | 第22-24页 |
| 2.2.3.1 总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.3.2 cDNA模板第一条链合成 | 第22-23页 |
| 2.2.3.3 RNA反转录 | 第23-24页 |
| 2.2.4 目的基因克隆及序列分析 | 第24-26页 |
| 2.2.4.1 克隆引物的设计 | 第24页 |
| 2.2.4.2 PCR扩增 | 第24页 |
| 2.2.4.3 PCR产物回收、连接转化及测序 | 第24-26页 |
| 2.2.5 双酶切技术构建重组质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.5.1 表达引物的设计 | 第26页 |
| 2.2.5.2 目的片段与克隆载体的连接 | 第26页 |
| 2.2.5.3 双酶切反应 | 第26页 |
| 2.2.5.4 连接表达载体 | 第26-27页 |
| 2.2.6 His标签重组蛋白的原核表达和纯化 | 第27-29页 |
| 2.2.6.1 重组蛋白的原核表达及检测 | 第27页 |
| 2.2.6.2 6×His标签重组蛋白的纯化 | 第27-29页 |
| 2.2.7 多克隆抗体的制备及Western blotting分析 | 第29-30页 |
| 2.2.7.1 多克隆抗体的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.7.2 Western blotting分析 | 第30页 |
| 2.2.8 体外泛素化实验 | 第30-32页 |
| 2.2.8.1 CgE3Rv1重组蛋白的原位复性 | 第31页 |
| 2.2.8.2 CgE3Rv1重组蛋白的体外泛素化 | 第31-32页 |
| 2.2.9 免疫荧光组织化学检测 | 第32-34页 |
| 2.2.9.1 免疫荧光组织化学 | 第32-33页 |
| 2.2.9.2 免疫细胞化学 | 第33-34页 |
| 2.2.10 原位杂交 | 第34-36页 |
| 2.2.10.1 DIG标记的CgE3Rv1 RNA探针的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.10.2 原位杂交过程 | 第35-36页 |
| 2.2.11 实时荧光定量PCR | 第36-37页 |
| 2.2.12 数据统计分析 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果 | 第38-48页 |
| 3.1 长牡蛎CgE3Rv1的分子特征及进化分析 | 第38-40页 |
| 3.1.1 长牡蛎CgE3Rv1的分子特征 | 第38页 |
| 3.1.2 长牡蛎CgE3Rv1的进化分析 | 第38-40页 |
| 3.2 长牡蛎CgE3Rv1-RINGv重组蛋白及多克隆抗体的获得 | 第40-41页 |
| 3.3 长牡蛎CgE3Rv1基因的组织分布和细胞定位 | 第41-44页 |
| 3.3.1 长牡蛎CgE3Rv1基因mRNA水平的组织分布 | 第41-42页 |
| 3.3.2 长牡蛎CgE3Rv1基因蛋白水平的组织分布和细胞定位 | 第42-44页 |
| 3.4 长牡蛎CgE3Rv1在长牡蛎雄性性腺的准确定位 | 第44-45页 |
| 3.5 长牡蛎CgE3Rv1-RINGv参与体外的泛素化反应 | 第45-46页 |
| 3.6 长牡蛎CgE3Rv1对PAMPs刺激的免疫响应 | 第46-47页 |
| 3.7 长牡蛎CgE3Rv1对LPS和ACh连续刺激的免疫响应 | 第47-48页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 CgE3Rv1中具有较为保守的RINGv结构特征 | 第48-49页 |
| 4.2 CgE3Rv1具有泛素连接酶的活性 | 第49-50页 |
| 4.3 CgE3Rv1基因的mRNA在不同组织中存在差异的表达 | 第50-51页 |
| 4.4 CgE3Rv1参与了对LPS刺激的免疫应答 | 第51-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
| 附录 | 第61页 |
