| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-30页 |
| 1 病原学 | 第14-21页 |
| 1.1 病毒分类及基本结构 | 第14-15页 |
| 1.2 理化特性 | 第15页 |
| 1.3 生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.4 病毒基因组结构 | 第16-20页 |
| 1.4.1 gB基因 | 第18页 |
| 1.4.2 gC基因 | 第18页 |
| 1.4.3 gD基因 | 第18-19页 |
| 1.4.4 gG基因 | 第19页 |
| 1.4.5 gJ基因 | 第19页 |
| 1.4.6 TK基因 | 第19-20页 |
| 1.4.7 其它基因 | 第20页 |
| 1.5 病毒复制 | 第20-21页 |
| 2 流行病学 | 第21页 |
| 3 临床症状及病理学变化 | 第21-22页 |
| 4 诊断 | 第22-24页 |
| 4.1 组织学检查 | 第22页 |
| 4.2 电镜检查 | 第22-23页 |
| 4.3 病毒分离 | 第23页 |
| 4.4 免疫荧光试验 | 第23页 |
| 4.5 琼脂扩散试验 | 第23页 |
| 4.6 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第23-24页 |
| 4.7 病毒中和试验 | 第24页 |
| 4.8 聚合酶链式反应(PCR) | 第24页 |
| 5 防制 | 第24-25页 |
| 6 兽用生物制品国家标准物质的研究现状 | 第25-30页 |
| 6.1 OIE传染性喉气管炎病毒检测技术标准 | 第25-26页 |
| 6.2 标准物质的作用 | 第26-27页 |
| 6.3 我国兽用标准物质现状 | 第27-30页 |
| 研究内容一 禽传染性喉气管炎病毒gJ蛋白表达与单克隆抗体的研制 | 第30-53页 |
| 1 材料 | 第31页 |
| 1.1 生物材料 | 第31页 |
| 1.2 试剂与载体 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-42页 |
| 2.1 ILTV gJ蛋白的原核表达 | 第31-36页 |
| 2.1.1 引物设计及目的片段的扩增 | 第31-32页 |
| 2.1.2 目的片段的克隆 | 第32-33页 |
| 2.1.3 重组质粒的转化 | 第33页 |
| 2.1.4 阳性质粒的提取及鉴定 | 第33页 |
| 2.1.5 ILTV gJ基因原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.1.6 重组蛋白His-gJ的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.1.7 重组蛋白His-gJ蛋白的纯化 | 第35页 |
| 2.1.8 Western-blot鉴定重组蛋白His-gJ抗原性 | 第35-36页 |
| 2.2 抗ILTV gJ单克隆抗体的制备 | 第36-40页 |
| 2.2.1 动物免疫 | 第36页 |
| 2.2.2 细胞融合的准备 | 第36页 |
| 2.2.3 饲养细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.4 细胞融合 | 第37页 |
| 2.2.5 阳性克隆筛选方法的建立 | 第37页 |
| 2.2.6 阳性杂交瘤的筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.7 阳性杂交瘤的亚克隆及冻存 | 第38页 |
| 2.2.8 单克隆抗体的特性鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.9 腹水的制备及纯化 | 第39-40页 |
| 2.3 检测ILTV抗体间接ELISA方法的初步建立 | 第40-42页 |
| 2.3.1 间接ELISA的程序 | 第40-41页 |
| 2.3.2 最适抗原包被量与抗体工作浓度的优化 | 第41页 |
| 2.3.3 最适反应时间的确定 | 第41页 |
| 2.3.4 最适显色时间的确定 | 第41-42页 |
| 2.3.5 临界值的确定 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-51页 |
| 3.1 gJ蛋白的表达 | 第42-45页 |
| 3.1.1 ILTV WG株gJ基因扩增结果 | 第42-43页 |
| 3.1.2 pET-32a-gJ原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.1.3 重组蛋白的诱导表达 | 第44页 |
| 3.1.4 重组蛋白的纯化及抗原性鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2 抗ILTV gJ单克隆抗体的制备 | 第45-49页 |
| 3.2.1 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第45-46页 |
| 3.2.2 单克隆抗体亚型鉴定 | 第46页 |
| 3.2.3 单克隆抗体与全病毒反应性 | 第46-47页 |
| 3.2.4 IFA证实单抗能识别细胞感染中的病毒抗原 | 第47-48页 |
| 3.2.5 抗体纯化效果 | 第48-49页 |
| 3.3 检测ILTV抗体间接ELISA方法的初步建立 | 第49-51页 |
| 3.3.1 最适抗原包被量与抗体工作浓度 | 第49-50页 |
| 3.3.2 最适反应时间的确定 | 第50-51页 |
| 3.3.3 最适显色时间的确定 | 第51页 |
| 3.3.4 临界值的确定 | 第51页 |
| 4 小结和讨论 | 第51-53页 |
| 研究内容二 禽传染性喉气管炎病毒标准抗原及抗体的制备 | 第53-73页 |
| 1 材料 | 第54页 |
| 1.1 生物材料 | 第54页 |
| 1.2 主要仪器和试剂 | 第54页 |
| 2 方法 | 第54-62页 |
| 2.1 ILTV标准抗原的制备 | 第54-55页 |
| 2.1.1 病毒扩增 | 第54-55页 |
| 2.1.2 病毒基因组的提取 | 第55页 |
| 2.2 ILTV多抗血清的制备 | 第55页 |
| 2.3 禽传染性喉气管炎病毒标准物质的标定 | 第55-62页 |
| 2.3.1 标准抗原的纯粹性鉴定 | 第55-57页 |
| 2.3.2 病毒抗原中病毒ELD50含量的测定 | 第57页 |
| 2.3.3 标准血清的ELISA反应性的测定 | 第57-58页 |
| 2.3.4 ILTV多抗血清特异性鉴定 | 第58页 |
| 2.3.5 阳性及弱阳性血清的确定 | 第58页 |
| 2.3.6 标准抗原及血清的分装 | 第58-59页 |
| 2.3.7 物理性状的检查 | 第59页 |
| 2.3.8 无菌检验 | 第59页 |
| 2.3.9 支原体检验 | 第59-60页 |
| 2.3.10 血清效价测定 | 第60页 |
| 2.3.11 血清均一性检验 | 第60页 |
| 2.3.12 血清稳定性检验 | 第60页 |
| 2.3.13 血清长期保存性测定 | 第60页 |
| 2.3.14 ILTV标准抗体用于商品化ELISA试剂盒的检验 | 第60-62页 |
| 3 结果 | 第62-71页 |
| 3.1 ILTV标准抗原的制备 | 第62页 |
| 3.1.1 标准抗原中ICP4基因 | 第62页 |
| 3.2 禽传染性喉气管炎病毒标准物质的标定 | 第62-71页 |
| 3.2.1 标准抗原的纯粹性鉴定结果 | 第62-63页 |
| 3.2.2 标准抗原中病毒ELD50含量 | 第63-64页 |
| 3.2.3 标准血清的ELISA反应性 | 第64-65页 |
| 3.2.4 标准血清抗体的特异性 | 第65-67页 |
| 3.2.5 阳性及弱阳性血清的确定 | 第67页 |
| 3.2.6 标准物质的分装 | 第67页 |
| 3.2.7 物理性状的检查 | 第67页 |
| 3.2.8 无菌检验 | 第67-68页 |
| 3.2.9 支原体检验 | 第68页 |
| 3.2.10 冻干和防腐剂处理对标准抗体效价的影响 | 第68-69页 |
| 3.2.11 均一性 | 第69页 |
| 3.2.12 稳定性 | 第69页 |
| 3.2.13 长期保存 | 第69-70页 |
| 3.2.14 ILTV标准抗体对商品化ELISA试剂盒检验结果 | 第70-71页 |
| 4 小结和讨论 | 第71-73页 |
| 全文总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
