| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 火鸡疱疹病毒的研究进展 | 第13-19页 |
| 1 HVT的分子生物学特性 | 第13-14页 |
| 2 HVT作为载体的研究进展 | 第14-16页 |
| 3 重组病毒的构建方法 | 第16页 |
| 4 影响构建重组HVT的主要因素 | 第16-17页 |
| 4.1 插入位点的选择 | 第16-17页 |
| 4.2 表达外源基因的启动子选择 | 第17页 |
| 5 禽流感重组疫苗的研究进展 | 第17-19页 |
| 第二章 表达H5亚型禽流感病毒血凝素的重组火鸡疱疹病毒构建及其免疫效力试验 | 第19-48页 |
| 1 材料 | 第19-21页 |
| 1.1 鸡胚及试验动物 | 第19页 |
| 1.2 毒株、菌株和质粒 | 第19-20页 |
| 1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 1.3.1 主要化学试剂 | 第20页 |
| 1.3.2 分子生物学试剂 | 第20页 |
| 1.4 分子生物学软件 | 第20-21页 |
| 1.5 主要仪器 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-34页 |
| 2.1 转移载体pFR的构建 | 第21-25页 |
| 2.1.1 同源臂引物的设计 | 第21页 |
| 2.1.2 HVT基因组的获取 | 第21-22页 |
| 2.1.3 目的片段的克隆与测序 | 第22-23页 |
| 2.1.4 转移载体p-FR的构建 | 第23-24页 |
| 2.1.5 转移载体的酶切鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2 真核表达载体pT-cmv-HA的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第25页 |
| 2.2.2 病毒的扩增 | 第25页 |
| 2.2.3 病毒RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.4 RT-PCR | 第25-26页 |
| 2.2.5 PCR产物连接与阳性克隆的鉴定 | 第26页 |
| 2.2.6 克隆载体pT-cmv-HA的构建 | 第26-27页 |
| 2.3 转移载体pFR-EGFP和pFR-HA的构建 | 第27-28页 |
| 2.4 转移载体的鉴定表达 | 第28-29页 |
| 2.4.1 载体pFR-EGFP的鉴定 | 第28页 |
| 2.4.2 载体pFR-HA-R6、pFR-HA-R7、pFR-HA-8的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.5 表达绿色荧光蛋白的重组火鸡疱疹病毒构建 | 第29-30页 |
| 2.5.1 HVT基因组的提取 | 第29页 |
| 2.5.2 表达绿色荧光蛋白(EGFP)的重组病毒拯救 | 第29-30页 |
| 2.5.3 重组病毒rHVT-EGFP的纯化 | 第30页 |
| 2.6 表达H5亚型AIV HA基因重组HVT的构建 | 第30-31页 |
| 2.7 重组病毒的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.7.1 PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.7.2 Western-Blot试验鉴定 | 第31-32页 |
| 2.7.3 间接免疫荧光试验(IFA)鉴定 | 第32页 |
| 2.7.4 重组病毒在CEF生长特性的检测 | 第32页 |
| 2.8 重组病毒对H5亚型AIV的免疫保护评价 | 第32-34页 |
| 2.8.1 动物试验设计 | 第32-33页 |
| 2.8.2 临床症状及剖检病变的观察 | 第33页 |
| 2.8.3 排毒检测 | 第33-34页 |
| 3. 结果 | 第34-46页 |
| 3.1 转移载体pFR的构建 | 第34-35页 |
| 3.1.1 同源臂的克隆及鉴定 | 第34页 |
| 3.1.2 转移载体pFR的构建与酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2 转移载体pFR-EGFP的构建与酶切鉴定 | 第35页 |
| 3.3 转移载体pFR-EGFP的表达鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 重组病毒rHVT-EGFP的构建 | 第36页 |
| 3.5 真核表达载体pFR-HA-R6、pFR-HA-R7、pFR-HA-R8的构建 | 第36-37页 |
| 3.5.1 HA基因的克隆 | 第36-37页 |
| 3.5.2 HA基因表达盒的扩增 | 第37页 |
| 3.6 转移载体pFR-HA-R6、pFR-HA-R7、pFR-HA-R8的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.6.1 酶切鉴定 | 第38页 |
| 3.6.2 Western-Blot试验鉴定 | 第38页 |
| 3.7 重组病毒rHVT-HA-R6、rHVT-HA-R7、rHVT-HA-R8的构建 | 第38-39页 |
| 3.8 重组病毒rHVT-HA-R6、rHVT-HA-R7、rHVT-HA-R8的鉴定 | 第39-43页 |
| 3.8.1 PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.8.2 间接免疫荧光试验 | 第40-41页 |
| 3.8.3 Western-Blot试验 | 第41-42页 |
| 3.8.4 重组病毒在CEF上的生长曲线 | 第42-43页 |
| 3.9 重组病毒的免疫效力评价 | 第43-46页 |
| 3.9.1 HI抗体消长规律 | 第43-44页 |
| 3.9.2 攻毒后排毒率 | 第44-45页 |
| 3.9.3 发病率和死亡率 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-48页 |
| 全文总结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
