摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
第一章 国内外研究现状及本研究目的内容 | 第11-22页 |
1.1 轮状病毒与肠道病毒71型概述 | 第11-14页 |
1.1.1 肠道病毒71型的分类与流行 | 第11-12页 |
1.1.2 轮状病毒的分类与流行 | 第12-13页 |
1.1.3 肠道病毒71型结构概述 | 第13页 |
1.1.4 轮状病毒结构概述 | 第13-14页 |
1.2 肠道病毒71型及轮状病毒疫苗种类 | 第14-16页 |
1.2.1 灭活疫苗 | 第14页 |
1.2.2 减毒活疫苗 | 第14-15页 |
1.2.3 相关DNA疫苗 | 第15页 |
1.2.4 病毒颗粒样疫苗 | 第15-16页 |
1.3 轮状病毒-肠道病毒71型VLPs的形成与应用 | 第16页 |
1.4 轮状病毒VP4基因有关研究 | 第16-17页 |
1.5 杆状病毒多基因表达载体系统 | 第17-19页 |
1.6 研究目的与内容 | 第19-22页 |
第二章 实验材料和方法 | 第22-36页 |
2.1 实验材料 | 第22-23页 |
2.1.1 菌株,载体,细胞系 | 第22页 |
2.1.2 酶与试剂 | 第22-23页 |
2.2 主要仪器 | 第23-24页 |
2.3 实验室常用溶液和试剂配制 | 第24-27页 |
2.3.1 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第24页 |
2.3.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂 | 第24-25页 |
2.3.3 蛋白免疫印迹所需试剂 | 第25页 |
2.3.4 SDS-PAGE电泳检测 | 第25页 |
2.3.5 Western Blot鉴定 | 第25-26页 |
2.3.6 抗生素的配制及实验相关试剂的配制 | 第26页 |
2.3.7 细菌培养基的配制 | 第26-27页 |
2.3.8 昆虫细胞Grace培养基的配制 | 第27页 |
2.4 分子生物学基本操作 | 第27-30页 |
2.4.1 质粒溶液的提取 | 第27页 |
2.4.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
2.4.3 琼脂糖凝胶回收 | 第27页 |
2.4.4 PCR溶液回收 | 第27-28页 |
2.4.5 病毒基因组提取 | 第28页 |
2.4.6 感受态的制备方法 | 第28页 |
2.4.7 感受态细胞AmMulitBacmid/SW106/asd-/inv+的制备 | 第28-29页 |
2.4.8 大肠杆菌TOP10转化 | 第29页 |
2.4.9 转座和重组 | 第29-30页 |
2.4.10 构建重组杆状病毒 | 第30页 |
2.5 昆虫细胞培养基本操作 | 第30-31页 |
2.5.1 细胞的复苏 | 第30页 |
2.5.2 细胞的传代 | 第30-31页 |
2.5.3 细胞的冻存 | 第31页 |
2.6 多种转移载体的构建 | 第31-33页 |
2.6.1 轮状病毒各基因的克隆与测序 | 第31-32页 |
2.6.2 转移载体19TS-haev71-vp2cmyc的构建 | 第32-33页 |
2.6.3 p10启动子驱动的VP2基因绿色单荧光转移载体的构建 | 第33页 |
2.6.4 p10驱动VP2、ph驱动VP6基因绿色单荧光转移载体的构建 | 第33页 |
2.6.5 ph启动子驱动VP7基因红色单荧光转移载体的构建 | 第33页 |
2.6.6 ph驱动VP7、p10驱动VP4基因红色单荧光转移载体的构建 | 第33页 |
2.7 构建重组病毒 | 第33-34页 |
2.8 重组杆状病毒的照片 | 第34-35页 |
2.9 病毒感染与蛋白表达的检测 | 第35-36页 |
2.9.1 病毒感染细胞 | 第35页 |
2.9.2 细胞裂解 | 第35页 |
2.9.3 Western Blot检测蛋白表达量 | 第35-36页 |
第三章 结果与分析 | 第36-53页 |
3.1 轮状病毒VP2、VP4、VP6、VP7、融合ER1,2基因的克隆及测序 | 第36-39页 |
3.2 融合基因ER1,2及各转移载体酶切结果 | 第39-43页 |
3.2.1 融合基因ER1,2酶切结果 | 第39页 |
3.2.2 转移载体pUCDM△speI-XIGP-VP2酶切结果 | 第39-40页 |
3.2.3 转移载体pUCDM△speI-XIGP-VP2-VP6酶切结果 | 第40-41页 |
3.2.4 转移载体pFBDM△speI-IM-VP7酶切结果 | 第41页 |
3.2.5 转移载体pFBDM△speI-IM-VP7-VP4酶切结果 | 第41-42页 |
3.2.6 转移载体pUCDM△speI-XIGP-ER1,2酶切结果 | 第42-43页 |
3.2.7 转移载体pUCDM△speI-XIGP-ER1,2-VP6酶切结果 | 第43页 |
3.3 构建携带不同基因的重组病毒 | 第43-44页 |
3.4 PCR检测病毒基因组各基因 | 第44-48页 |
3.5 构建成功的杆状病毒的荧光照片 | 第48-49页 |
3.6 SDS-PAGE检测重组病毒各基因蛋白表达 | 第49-50页 |
3.7 Western Blot检测重组病毒各基因蛋白表达 | 第50-53页 |
第四章 结论与讨论 | 第53-56页 |
参考文献 | 第56-60页 |
附录 | 第60-67页 |
附录A:质粒图谱 | 第60-66页 |
附录B:攻读学位期间获得研究成果 | 第66-67页 |
致谢 | 第67页 |