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嵌合型轮状病毒与肠道病毒71型病毒样颗粒的重组杆状病毒表达载体的构建

摘要第7-9页
Abstract第9-10页
第一章 国内外研究现状及本研究目的内容第11-22页
    1.1 轮状病毒与肠道病毒71型概述第11-14页
        1.1.1 肠道病毒71型的分类与流行第11-12页
        1.1.2 轮状病毒的分类与流行第12-13页
        1.1.3 肠道病毒71型结构概述第13页
        1.1.4 轮状病毒结构概述第13-14页
    1.2 肠道病毒71型及轮状病毒疫苗种类第14-16页
        1.2.1 灭活疫苗第14页
        1.2.2 减毒活疫苗第14-15页
        1.2.3 相关DNA疫苗第15页
        1.2.4 病毒颗粒样疫苗第15-16页
    1.3 轮状病毒-肠道病毒71型VLPs的形成与应用第16页
    1.4 轮状病毒VP4基因有关研究第16-17页
    1.5 杆状病毒多基因表达载体系统第17-19页
    1.6 研究目的与内容第19-22页
第二章 实验材料和方法第22-36页
    2.1 实验材料第22-23页
        2.1.1 菌株,载体,细胞系第22页
        2.1.2 酶与试剂第22-23页
    2.2 主要仪器第23-24页
    2.3 实验室常用溶液和试剂配制第24-27页
        2.3.1 琼脂糖凝胶电泳试剂第24页
        2.3.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂第24-25页
        2.3.3 蛋白免疫印迹所需试剂第25页
        2.3.4 SDS-PAGE电泳检测第25页
        2.3.5 Western Blot鉴定第25-26页
        2.3.6 抗生素的配制及实验相关试剂的配制第26页
        2.3.7 细菌培养基的配制第26-27页
        2.3.8 昆虫细胞Grace培养基的配制第27页
    2.4 分子生物学基本操作第27-30页
        2.4.1 质粒溶液的提取第27页
        2.4.2 琼脂糖凝胶电泳第27页
        2.4.3 琼脂糖凝胶回收第27页
        2.4.4 PCR溶液回收第27-28页
        2.4.5 病毒基因组提取第28页
        2.4.6 感受态的制备方法第28页
        2.4.7 感受态细胞AmMulitBacmid/SW106/asd-/inv+的制备第28-29页
        2.4.8 大肠杆菌TOP10转化第29页
        2.4.9 转座和重组第29-30页
        2.4.10 构建重组杆状病毒第30页
    2.5 昆虫细胞培养基本操作第30-31页
        2.5.1 细胞的复苏第30页
        2.5.2 细胞的传代第30-31页
        2.5.3 细胞的冻存第31页
    2.6 多种转移载体的构建第31-33页
        2.6.1 轮状病毒各基因的克隆与测序第31-32页
        2.6.2 转移载体19TS-haev71-vp2cmyc的构建第32-33页
        2.6.3 p10启动子驱动的VP2基因绿色单荧光转移载体的构建第33页
        2.6.4 p10驱动VP2、ph驱动VP6基因绿色单荧光转移载体的构建第33页
        2.6.5 ph启动子驱动VP7基因红色单荧光转移载体的构建第33页
        2.6.6 ph驱动VP7、p10驱动VP4基因红色单荧光转移载体的构建第33页
    2.7 构建重组病毒第33-34页
    2.8 重组杆状病毒的照片第34-35页
    2.9 病毒感染与蛋白表达的检测第35-36页
        2.9.1 病毒感染细胞第35页
        2.9.2 细胞裂解第35页
        2.9.3 Western Blot检测蛋白表达量第35-36页
第三章 结果与分析第36-53页
    3.1 轮状病毒VP2、VP4、VP6、VP7、融合ER1,2基因的克隆及测序第36-39页
    3.2 融合基因ER1,2及各转移载体酶切结果第39-43页
        3.2.1 融合基因ER1,2酶切结果第39页
        3.2.2 转移载体pUCDM△speI-XIGP-VP2酶切结果第39-40页
        3.2.3 转移载体pUCDM△speI-XIGP-VP2-VP6酶切结果第40-41页
        3.2.4 转移载体pFBDM△speI-IM-VP7酶切结果第41页
        3.2.5 转移载体pFBDM△speI-IM-VP7-VP4酶切结果第41-42页
        3.2.6 转移载体pUCDM△speI-XIGP-ER1,2酶切结果第42-43页
        3.2.7 转移载体pUCDM△speI-XIGP-ER1,2-VP6酶切结果第43页
    3.3 构建携带不同基因的重组病毒第43-44页
    3.4 PCR检测病毒基因组各基因第44-48页
    3.5 构建成功的杆状病毒的荧光照片第48-49页
    3.6 SDS-PAGE检测重组病毒各基因蛋白表达第49-50页
    3.7 Western Blot检测重组病毒各基因蛋白表达第50-53页
第四章 结论与讨论第53-56页
参考文献第56-60页
附录第60-67页
    附录A:质粒图谱第60-66页
    附录B:攻读学位期间获得研究成果第66-67页
致谢第67页

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