鸡传染性贫血病毒的环介导等温扩增检测系统的建立与应用
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 综述 | 第11-23页 |
| 1.1 鸡传染性贫血病 | 第11-16页 |
| 1.1.1 病原学特点 | 第11-12页 |
| 1.1.2 流行病学特点 | 第12-13页 |
| 1.1.3 临床特点 | 第13页 |
| 1.1.4 诊断要点 | 第13-14页 |
| 1.1.5 防控措施 | 第14-16页 |
| 1.2 病毒检测的分子生物学诊断 | 第16-22页 |
| 1.2.1 分子生物学诊断的意义 | 第16页 |
| 1.2.2 主流分子生物学诊断方法 | 第16-18页 |
| 1.2.3 LAMP诊断方法 | 第18-22页 |
| 1.2.3.1 LAMP反应试剂 | 第18页 |
| 1.2.3.2 LAMP技术原理 | 第18页 |
| 1.2.3.3 LAMP反应扩增原理 | 第18-19页 |
| 1.2.3.4 LAMP的产物检测 | 第19页 |
| 1.2.3.5 LAMP引物设计的原则 | 第19页 |
| 1.2.3.6 LAMP法优点 | 第19-20页 |
| 1.2.3.7 LAMP检测技术的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.3.8 LAMP技术的改良 | 第21-22页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验试剂及主要溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.3.1 主要药品及试剂 | 第24页 |
| 2.3.2 常用溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.4 主要实验方法 | 第25-32页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第25页 |
| 2.4.2 CIAV DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.4.3 CIAV标准质粒的构建 | 第26-30页 |
| 2.4.3.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第26-27页 |
| 2.4.3.2 基因克隆 | 第27页 |
| 2.4.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.4.3.4 琼脂糖凝胶胶回收 | 第27-28页 |
| 2.4.3.5 DNA片段与载体连接 | 第28页 |
| 2.4.3.6 转化 | 第28-29页 |
| 2.4.3.7 菌液PCR并保菌 | 第29页 |
| 2.4.3.8 质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.4.4 VP2基因保守区的LAMP扩增 | 第30-31页 |
| 2.4.5 LAMP方法的优化 | 第31-32页 |
| 2.4.5.1 HNB浓度的优化 | 第31页 |
| 2.4.5.2 镁离子浓度的优化 | 第31页 |
| 2.4.5.3 内引物量的优化 | 第31页 |
| 2.4.5.4 反应时间的优化 | 第31-32页 |
| 2.4.5.5 反应温度的优化 | 第32页 |
| 2.4.6 LAMP反应的特异性试验 | 第32页 |
| 2.4.7 LAMP反应的灵敏性试验 | 第32页 |
| 2.4.8 LAMP反应的重复性试验 | 第32页 |
| 2.4.9 LAMP对临床样品检测 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-48页 |
| 3.1 CIAV保守区序列扩增 | 第32-35页 |
| 3.1.1 CIAV保守区序列的PCR扩增 | 第33页 |
| 3.1.2 CIAV保守区重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.3 CIAV保守区LAMP扩增 | 第34-35页 |
| 3.2 LAMP反应系统的优化 | 第35-40页 |
| 3.2.1 不同浓度HNB的优化 | 第35-36页 |
| 3.2.2 不同浓度镁离子的优化 | 第36-37页 |
| 3.2.3 不同内引物浓度的优化 | 第37-38页 |
| 3.2.4 不同反应时间的优化 | 第38-39页 |
| 3.2.5 不同反应温度的优化 | 第39-40页 |
| 3.3 LAMP反应的特异性试验 | 第40-41页 |
| 3.4 LAMP反应的灵敏性试验 | 第41-43页 |
| 3.5 LAMP反应的批内重复性试验 | 第43-45页 |
| 3.6 LAMP反应系统的临床样品检测 | 第45-48页 |
| 4 结论与讨论 | 第48-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录一 | 第59-60页 |
| 附录二：攻读学位期间取得的研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
