| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-16页 |
| 1. 植物黄酮研究进展 | 第10-14页 |
| ·植物黄酮及其生物学功能 | 第10-11页 |
| ·植物黄酮的生物合成 | 第11-12页 |
| ·黄酮醇合酶(FLS) | 第12-14页 |
| 2. 苦荞及其黄酮 | 第14-15页 |
| 3. 研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 苦荞黄酮醇合酶FLS2和FLS3的基因克隆及序列分析 | 第16-29页 |
| 1. 材料和方法 | 第16-22页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·材料和菌株 | 第16页 |
| ·主要试剂和药品 | 第16-17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·主要溶液 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-22页 |
| ·苦荞花RNA的提取 | 第17-18页 |
| ·RNA的纯度和浓度的检测 | 第18-19页 |
| ·第一链cDNA的制备 | 第19-20页 |
| ·苦荞黄酮醇合酶基因FLS2和FLS3的克隆 | 第20-22页 |
| 2 结果与分析 | 第22-27页 |
| ·苦荞花RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·苦荞黄酮醇合酶基因FLS2和FLS3的克隆 | 第23-24页 |
| ·苦荞黄酮醇合酶基因FLS2和FLS3的生物信息学分析 | 第24-27页 |
| 3. 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 苦荞黄酮醇合酶FtFLS2和FtFLS3在大肠杆菌中的表达及其最适底物分析 | 第29-46页 |
| 1. 材料和方法 | 第29-35页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·质粒和菌株 | 第29页 |
| ·主要试剂和药品 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·苦荞黄酮醇合酶FtFLS2和FtFLS3表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·苦荞黄酮醇合酶FtFLS2和FtFLS3在大肠杆菌中的表达 | 第31页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的新和层析 | 第32-33页 |
| ·重组电泳纯蛋白的超滤 | 第33页 |
| ·考马斯亮蓝G-250法测定蛋白含量 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白酶活的定性鉴定(TLC法) | 第34页 |
| ·重组蛋白的酶活测定 | 第34-35页 |
| ·苦荞黄酮醇合酶FtFLS1、FtFLS2和FtFLS3催化动力学参数测定 | 第35页 |
| 2. 结果与分析 | 第35-42页 |
| ·pET30b-FtFLS2表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·pET30b-FtFLS3融合表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·苦荞FtFLS1、FtFLS2和FtFLS3在大肠杆菌中的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·重组FtFLS1、FtFLS2和FtFLS3酶活的定性鉴定 | 第38-39页 |
| ·槲皮素、山奈酚和杨梅素标准曲线的建立 | 第39-40页 |
| ·FtFLS1,FtFLS2和FtFLS3的纯化 | 第40-41页 |
| ·FtFLS1,FtFLS2和FtFLS3的酶活测定 | 第41页 |
| ·FtFLS1,FtFLS2和FtFLS3的酶催动力学参数测定 | 第41-42页 |
| 3. 讨论 | 第42-46页 |
| 结论与展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
