| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 油橄榄概述 | 第12页 |
| 2 黄酮类化合物的研究进展 | 第12-17页 |
| ·黄酮的种类和分布 | 第12-13页 |
| ·油橄榄中的黄酮 | 第13-14页 |
| ·黄酮的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·黄酮对植物的生理作用 | 第14页 |
| ·黄酮的药理作用 | 第14-15页 |
| ·黄酮的合成代谢途径 | 第15-17页 |
| 3 黄酮合成代谢途径中关键酶及其基因的研究进展 | 第17-19页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶及其基因的研究进展 | 第17页 |
| ·查尔酮合酶及其基因的研究进展 | 第17-18页 |
| ·查尔酮异构酶及其基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 4 一种改进型染色体步移技术 | 第19-21页 |
| 5 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 油橄榄PAL、CHS、CHI全长的克隆及序列分析 | 第22-47页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第22-23页 |
| ·油橄榄叶片 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第22-23页 |
| ·菌株和培养基 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-32页 |
| ·油橄榄基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·油橄榄总RNA的提取及cDNA第一链制备 | 第24-25页 |
| ·油橄榄叶片总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·制备cDNA第一链 | 第25页 |
| ·油橄榄PAL、CHS、CHI的克隆 | 第25-31页 |
| ·PCR引物的设计 | 第25-27页 |
| ·基因保守片段的克隆 | 第27-28页 |
| ·基因5'端未知序列的克隆 | 第28-29页 |
| ·基因3'端未知序列的克隆 | 第29-31页 |
| ·基因全长的克隆 | 第31页 |
| ·油橄榄PAL、CHS、CHI的生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-45页 |
| ·油橄榄叶片总DNA及总RNA的提取 | 第32页 |
| ·油橄榄PAL的克隆及序列分析 | 第32-37页 |
| ·油橄榄PAL的克隆 | 第32-33页 |
| ·OePAL的核苷酸序列分析 | 第33-35页 |
| ·OePAL的氨基酸序列分析 | 第35页 |
| ·OePAL蛋白的结构预测 | 第35-37页 |
| ·系统进化树的构建 | 第37页 |
| ·油橄榄CHS的克隆及序列分析 | 第37-41页 |
| ·油橄榄CHS的克隆 | 第37-38页 |
| ·OeCHS的核苷酸序列分析 | 第38-39页 |
| ·OeCHS的氨基酸序列分析 | 第39-40页 |
| ·OeCHS蛋白的结构预测 | 第40-41页 |
| ·系统进化树的构建 | 第41页 |
| ·油橄榄CHI的克隆及序列分析 | 第41-45页 |
| ·油橄榄CHI的克隆 | 第41-42页 |
| ·OeCHI的核苷酸序列分析 | 第42-43页 |
| ·OeCHI的氨基酸序列分析 | 第43页 |
| ·OeCHI蛋白的结构预测 | 第43-45页 |
| ·系统进化树的构建 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| ·OePAL、OeCHS、OeCHI的结构 | 第45-46页 |
| ·CHS与CHI之间的关系 | 第46-47页 |
| 第三章 OePAL在毕赤酵母中的表达 | 第47-64页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第47-49页 |
| ·菌种和质粒 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第47-48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| 2 实验方法 | 第49-56页 |
| ·克隆OePAL的目的序列 | 第49-50页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·酶切及回收 | 第50页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第50-51页 |
| ·转化筛选与鉴定 | 第51页 |
| ·pPICZαA-OePAL的线性化 | 第51页 |
| ·表达载体转化毕赤酵母X33 | 第51-52页 |
| ·毕赤酵母X33感受态的制备 | 第51-52页 |
| ·电击转化毕赤酵母X33感受态细胞 | 第52页 |
| ·重组酵母阳性转化子的筛选 | 第52页 |
| ·重组酵母的诱导表达及表达产物的纯化、检测 | 第52-54页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·重组酶的分离纯化 | 第53页 |
| ·重组酶的SDS-PAGE检测 | 第53-54页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第54-55页 |
| ·低浓度蛋白标准曲线的绘制 | 第54页 |
| ·酶液中蛋白含量的测定 | 第54-55页 |
| ·重组6×His-OePAL酶活性的测定 | 第55页 |
| ·重组6×His-OePAL酶学性质研究 | 第55-56页 |
| ·温度对重组酶活力的影响 | 第55页 |
| ·pH值对重组酶活力的影响 | 第55页 |
| ·金属离子对重组酶活力的影响 | 第55-56页 |
| ·重组酶反应动力学常数K_m的测定 | 第56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-62页 |
| ·OePAL目的序列的克隆 | 第56页 |
| ·重组质粒pPICZαA-OePAL的鉴定 | 第56-57页 |
| ·毕赤酵母X33/pPICZαA-OePAL阳性转化子的菌落PCR鉴定 | 第57-58页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第58页 |
| ·重组酶的比活力测定 | 第58-59页 |
| ·蛋白含量测定的标准曲线绘制 | 第58-59页 |
| ·计算重组酶的比活力 | 第59页 |
| ·重组酶的酶学性质分析 | 第59-62页 |
| ·温度对重组酶活力的影响 | 第59-60页 |
| ·pH值对重组酶活力的影响 | 第60-61页 |
| ·金属离子对重组酶活力的影响 | 第61页 |
| ·重组酶反应动力学常数K_m的测定 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| ·表达宿主菌及载体的选用 | 第62页 |
| ·重组质粒pPICZαA-OePAL的构建 | 第62-63页 |
| ·重组OePAL的活性及酶学性质分析 | 第63-64页 |
| 全文总结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |