| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| ·立题背景和意义 | 第9-10页 |
| ·国内外研究进展 | 第10-14页 |
| ·脂肪酶的研究概况 | 第10-11页 |
| ·根霉脂肪酶的研究 | 第11-12页 |
| ·前导肽功能的研究进展 | 第12-13页 |
| ·糖基化对P. pastoris表达蛋白的影响 | 第13-14页 |
| ·糖基化蛋白分析方法的研究 | 第14页 |
| ·课题研究思路、研究内容和课题来源 | 第14-16页 |
| ·研究思路 | 第14-15页 |
| ·研究内容 | 第15页 |
| ·课题来源 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-27页 |
| ·实验材料 | 第16-18页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·主要培养基与溶液 | 第16-17页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-27页 |
| ·RCL前导肽中Cys28 位点突变基因表达菌株的构建 | 第18-19页 |
| ·RCL前导肽中KR及糖基化位点突变基因表达菌株的构建 | 第19-21页 |
| ·ROL前导肽中引入N-糖基化位点表达菌株的构建 | 第21页 |
| ·脂肪酶基因的拷贝数和转录水平的鉴定 | 第21-23页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵 | 第23页 |
| ·重组菌的生长及蛋白表达 | 第23-24页 |
| ·重组蛋白的分离纯化及酶学性质测定 | 第24-26页 |
| ·脂肪酶的体外折叠研究 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-51页 |
| ·RCL前导肽中Cys28 对酶在P. pastoris中分泌表达的影响 | 第27-29页 |
| ·表达突变酶r27RCLC28S的P. pastoris基因工程菌的构建 | 第27页 |
| ·突变菌株GS115/pPIC9K-pro RCLC28S的摇瓶发酵 | 第27-29页 |
| ·P. pastoris表达的脂肪酶r27RCLC的N-糖基化鉴定 | 第29-31页 |
| ·内切糖苷酶EndoHf酶切处理脂肪酶r27RCLC | 第29页 |
| ·脂肪酶r27RCLC的MADLI-TOF-MS分析 | 第29-31页 |
| ·LC-MS/MS鉴定脂肪酶r27RCLC | 第31页 |
| ·RCL前导肽中N-糖基化对酶在P. pastoris中分泌表达的影响 | 第31-44页 |
| ·表达proRCLCNQ及N-糖基化位点突变酶的P. pastoris基因工程菌的构建 . 23 3.3.2 突变菌株GS115/pGAPK-pro RCLCNQ的摇瓶发酵 | 第31-32页 |
| ·突变菌株 GS115/p GAPK-pro RCLCNQ 的摇瓶发酵 | 第32-34页 |
| ·pro RCLCNQ的N-糖基化鉴定 | 第34-36页 |
| ·N-糖基化位点突变酶的表达和糖基化鉴定 | 第36-37页 |
| ·突变脂肪酶的基因拷贝数和转录水平 | 第37-39页 |
| ·N-糖基化对脂肪酶在P. pastoris中分泌表达的影响 | 第39-40页 |
| ·N-糖基化对脂肪酶的酶学性质的影响 | 第40-43页 |
| ·圆二色谱分析 | 第43-44页 |
| ·RCL的体外辅助折叠作用研究 | 第44-46页 |
| ·含不同糖链脂肪酶的表达和纯化 | 第44页 |
| ·脂肪酶体外折叠复性率的测定 | 第44-46页 |
| ·N-糖基化改造提高ROL在P. pastoris中的分泌表达水平 | 第46-51页 |
| ·表达重组ROL及引入N-糖基化突变酶菌株的构建与筛选 | 第46-47页 |
| ·重组ROL基因拷贝数的鉴定 | 第47-48页 |
| ·表达重组ROL及突变酶菌株生长曲线的测定 | 第48页 |
| ·N-糖基化对米根霉脂肪酶分泌水平的影响 | 第48-50页 |
| ·N-糖基化对米根霉脂肪酶胞外酶活的影响 | 第50-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51页 |
| 展望 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附表 | 第58-59页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第59页 |
