| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-29页 |
| ·琥珀酸的理化性质、功能、用途及市场需求 | 第11-12页 |
| ·琥珀酸的理化性质 | 第11页 |
| ·琥珀酸的功能、用途及市场需求 | 第11-12页 |
| ·琥珀酸的合成 | 第12-14页 |
| ·化学法合成琥珀酸 | 第12页 |
| ·生物法合成琥珀酸 | 第12-14页 |
| ·产琥珀酸菌株构建的国内外现状 | 第14-22页 |
| ·琥珀酸曼氏杆菌和琥珀酸放线杆菌 | 第14页 |
| ·大肠杆菌 | 第14-16页 |
| ·谷氨酸棒杆菌 | 第16-21页 |
| ·钝齿棒杆菌 | 第21页 |
| ·廉价原料的利用 | 第21-22页 |
| ·生物合成琥珀酸的最大理论得率 | 第22-23页 |
| ·代谢工程、系统代谢工程与合成生物学 | 第23-27页 |
| ·代谢工程、系统代谢工程与合成生物学 | 第23-25页 |
| ·代谢通量分析 | 第25-26页 |
| ·基元模式分析 | 第26页 |
| ·基元模式指导代谢工程改造 | 第26-27页 |
| ·选题背景 | 第27页 |
| ·研究思路 | 第27-29页 |
| 第二章 谷氨酸棒杆菌厌氧合成琥珀酸的途径鉴定 | 第29-59页 |
| ·实验材料 | 第29-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·主要实验试剂 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·主要溶液 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-44页 |
| ·菌株培养与发酵 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌碱裂法提取质粒 | 第36页 |
| ·谷氨酸棒杆菌基因组的提取 | 第36-37页 |
| ·谷氨酸棒杆菌质粒提取 | 第37页 |
| ·谷氨酸棒杆菌电转感受态细胞的制备与转化 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增 | 第38-39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·PCR 产物以及 DNA 片段切胶回收 | 第40-41页 |
| ·DNA 的酶切、去磷酸化和连接 | 第41-42页 |
| ·谷氨酸棒杆菌基因敲除原理 | 第42页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第42页 |
| ·发酵液中有机酸的测定 | 第42-44页 |
| ·葡萄糖浓度测定 | 第44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-56页 |
| ·琥珀酸合成途径中关键基因的选择 | 第44-47页 |
| ·ldhA 基因敲除 | 第47-48页 |
| ·pDsacB 敲除载体构建 | 第48-51页 |
| ·mdh 基因敲除 | 第51-52页 |
| ·pyc 基因敲除 | 第52-53页 |
| ·ppc 基因敲除 | 第53-54页 |
| ·pckA 基因敲除 | 第54-55页 |
| ·aceA 基因敲除 | 第55-56页 |
| ·单基因敲除对琥珀酸合成的影响 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 第三章 失活乙酸生成途径对琥珀酸合成的影响 | 第59-70页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·质粒和菌株 | 第60-61页 |
| ·实验仪器 | 第61页 |
| ·主要实验试剂 | 第61页 |
| ·主要培养基 | 第61页 |
| ·主要溶液 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-69页 |
| ·pta-ackA 操纵子的敲除 | 第62-63页 |
| ·pqo 基因的敲除 | 第63-65页 |
| ·cat 基因的敲除 | 第65-66页 |
| ·aceE 基因的敲除 | 第66-67页 |
| ·敲除乙酸途径对乙酸和琥珀酸合成的影响 | 第67-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第四章 基元模式分析与最佳琥珀酸合成途径的鉴定 | 第70-78页 |
| ·实验材料和方法 | 第70-71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-77页 |
| ·代谢网络的构建 | 第71-75页 |
| ·最佳琥珀酸合成途径的鉴定 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 第五章 通量分析比较指导代谢工程改造 | 第78-112页 |
| ·实验材料 | 第78-80页 |
| ·菌株和质粒 | 第78-79页 |
| ·主要仪器 | 第79页 |
| ·主要实验试剂 | 第79-80页 |
| ·主要培养基 | 第80页 |
| ·主要溶液 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-86页 |
| ·实际代谢通量分析 | 第80-83页 |
| ·发酵条件 | 第83-84页 |
| ·谷氨酸棒杆菌总 RNA 的抽提以及分析 | 第84页 |
| ·定量 PCR 分析 | 第84-85页 |
| ·酶活力测定 | 第85-86页 |
| ·胞内代谢物测定 | 第86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-111页 |
| ·靶点鉴定 | 第86-89页 |
| ·过表达回补途径对琥珀酸的影响 | 第89-95页 |
| ·乙醛酸循环重构对琥珀酸合成的影响 | 第95-97页 |
| ·gltA 基因过表达对琥珀酸合成的影响 | 第97-101页 |
| ·sucE 基因过表达对琥珀酸的影响 | 第101-106页 |
| ·高密度厌氧发酵生产琥珀酸 | 第106-110页 |
| ·同一发酵罐两阶段生产琥珀酸 | 第110-111页 |
| ·小结 | 第111-112页 |
| 第六章 好氧条件下琥珀酸生产菌株的构建 | 第112-132页 |
| ·实验材料 | 第114-115页 |
| ·菌株和质粒 | 第114页 |
| ·主要实验仪器 | 第114-115页 |
| ·主要实验试剂 | 第115页 |
| ·主要培养基 | 第115页 |
| ·主要溶液 | 第115页 |
| ·实验方法 | 第115-117页 |
| ·摇瓶培养 | 第115页 |
| ·发酵罐培养 | 第115-116页 |
| ·乙酰辅酶 A 合成酶活力测定 | 第116页 |
| ·胞内乙酰辅酶 A 的测定 | 第116-117页 |
| ·实验结果与讨论 | 第117-131页 |
| ·琥珀酸好氧生产菌株 C. glutamicum △sdhCAB 的构建及表征 | 第117-119页 |
| ·琥珀酸好氧生产菌株 C. glutamicum ZX1 的构建及表征 | 第119-120页 |
| ·副产物乙酸的再利用 | 第120-123页 |
| ·柠檬酸合酶过表达对琥珀酸合成的影响 | 第123-125页 |
| ·琥珀酸输出蛋白过表达对好氧琥珀酸合成的影响 | 第125-129页 |
| ·分批补料培养 | 第129页 |
| ·好氧条件下利用阿拉伯糖生产琥珀酸 | 第129-131页 |
| ·小结 | 第131-132页 |
| 第七章 结论与展望 | 第132-137页 |
| ·结论和创新点 | 第132-135页 |
| ·结论 | 第132-134页 |
| ·创新点 | 第134-135页 |
| ·展望 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-148页 |
| 发表论文和参加科研情况 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149页 |