| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一部分 酵母醌氧化还原酶ZTA1结构与催化机制研究 | 第16-56页 |
| 第一章 醌氧化还原酶的研究背景 | 第16-24页 |
| ·引言 | 第16-17页 |
| ·醌氧化还原酶QOR | 第17-24页 |
| ·醌氧化还原酶QOR的概述 | 第17-19页 |
| ·醌氧化还原酶QOR的三维结构 | 第19-23页 |
| ·酿酒酵母中的醌氧化还原酶Ztal | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料、设备与方法 | 第24-32页 |
| ·实验材料与设备 | 第24-25页 |
| ·菌株、质粒 | 第24页 |
| ·试剂、酶 | 第24页 |
| ·仪器设备 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·Zta1-p28重组质粒的构建 | 第25-29页 |
| ·Zta1蛋白的表达与纯化 | 第29页 |
| ·Zta1蛋白的结晶与数据收集 | 第29-30页 |
| ·Zta1晶体结构解析和精修 | 第30-31页 |
| ·计算机模拟底物结合 | 第31页 |
| ·Zta1野生型及突变体酶活分析 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第32-47页 |
| ·ZTA1表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·Zta1蛋白的表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·ZTA1的晶体学研究 | 第33-37页 |
| ·Zta1晶体的生长与优化 | 第33-34页 |
| ·Zta1衍射数据的收集与处理以及晶体结构的解析 | 第34-37页 |
| ·Zta1结构模型的质量评估 | 第37页 |
| ·ZTA1的晶体结构与辅酶结合位点 | 第37-41页 |
| ·Zta1的总体结构 | 第37-38页 |
| ·NADPH结合位点 | 第38-39页 |
| ·NADPH结合引起的诱导契合效应 | 第39-41页 |
| ·ZTA1活性位点的鉴定 | 第41-45页 |
| ·Zta1结合底物模型 | 第41-42页 |
| ·Zta1活性位点的酶活分析 | 第42-44页 |
| ·Zta1催化机理的模型 | 第44-45页 |
| ·进化中单个氨基酸的突变引起Z-CRYSTALLIN-LIKE QOR酶活的提高 | 第45-47页 |
| 本篇小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 第二部分 酵母巯基氧化酶ERV1结构与功能研究 | 第56-106页 |
| 第四章 巯基氧化酶ERV1的研究背景 | 第56-68页 |
| ·引言 | 第56-57页 |
| ·MIA40依赖的蛋白输入途径 | 第57-59页 |
| ·巯基氧化酶ERV1将MIA40重新氧化 | 第59-65页 |
| ·Erv1是FAD依赖的巯基氧化酶 | 第60-61页 |
| ·Erv1核心结构域具有巯基氧化酶活性 | 第61-62页 |
| ·Erv1的N端柔性区具有传递电子的功能 | 第62-64页 |
| ·Erv1二体是电子在亚基间传递的结构基础 | 第64-65页 |
| ·ERV1被细胞色素C氧化 | 第65-66页 |
| ·Mia40-Erv1二硫键传递体系中的电子传递 | 第66-67页 |
| ·酿酒酵母中的巯基氧化酶Erv1 | 第67-68页 |
| 第五章 实验材料、设备与方法 | 第68-76页 |
| ·实验材料与设备 | 第68页 |
| ·菌株、质粒 | 第68页 |
| ·试剂、酶 | 第68页 |
| ·仪器设备 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-76页 |
| ·重组质粒的构建 | 第68-73页 |
| ·Erv1蛋白的表达与纯化 | 第73-74页 |
| ·参与Erv1N和CTD复合物形成的半胱氨酸的鉴定 | 第74-75页 |
| ·Erv1CTD和Erv1m的结晶以及数据收集 | 第75页 |
| ·Erv1CTD和Erv1m晶体结构解析和精修 | 第75-76页 |
| 第六章 结果与讨论 | 第76-95页 |
| ·ERV1 CTD、ERVlN和ERV1M的表达与纯化 | 第76-78页 |
| ·Erv1CTD的表达与纯化 | 第76-77页 |
| ·Erv1N的表达与纯化 | 第77-78页 |
| ·Erv1m的表达与纯化 | 第78页 |
| ·ERV1CTD与ERV1M的晶体学研究 | 第78-82页 |
| ·Erv1CTD与Erv1m晶体的生长与优化 | 第78-79页 |
| ·Erv1CTD和Erv1m晶体衍射数据的收集、处理、结构解析 | 第79-82页 |
| ·Erv1CTD和Erv1m结构模型的质量评估 | 第82页 |
| ·ERV1CTD的结构 | 第82-85页 |
| ·Erv1CTD晶体结构 | 第82-83页 |
| ·Erv1CTD二体界面 | 第83-85页 |
| ·ERV1N与CTD参与复合物形成半胱氨酸的鉴定 | 第85-86页 |
| ·ERV1M的晶体结构 | 第86-87页 |
| ·电子在ERV1亚基间传递的结构基础 | 第87-90页 |
| ·NTD和CTD'形成的瞬时复合体 | 第87-88页 |
| ·NTD和CTD'结合机制 | 第88-90页 |
| ·ERV1与MIA40的识别模型 | 第90-91页 |
| ·电子从MIA40到ERV1的传递模式在动物和真菌中是通用的 | 第91-93页 |
| ·MIA40-ERV1二硫键传递体系的结构模型 | 第93-95页 |
| 本篇小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 第三部分 其他工作 | 第106-116页 |
| 第七章 酿酒酵母YKG9等氧化应激蛋白的结构与功能研究 | 第106-113页 |
| ·甲硫氨酸亚砜还原酶YKG9结合底物的晶体结构 | 第106-112页 |
| ·甲硫氨酸亚砜还原酶Ykg9的背景介绍 | 第106-107页 |
| ·Ykg9结合底物的晶体学研究 | 第107-109页 |
| ·Ykg9结合底物的总体结构 | 第109-110页 |
| ·Ykg9还原甲硫氨酸亚砜的机制 | 第110-112页 |
| ·参与合作的其他工作 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-116页 |
| 附录 | 第116-122页 |
| A：PET28B与PGEX-4T-2的载体改造 | 第116页 |
| B：引物设计规则 | 第116-117页 |
| C：大肠杆菌感受态的制备 | 第117页 |
| D：琼脂糖凝胶电泳的实验流程 | 第117-118页 |
| E：聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)的实验流程 | 第118-119页 |
| F：蛋白质结晶原理与方法 | 第119-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第123页 |
