| 论文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 蛋白质谷氨酰胺酶的研究进展 | 第15-29页 |
| 1 研究背景 | 第15-16页 |
| ·酪蛋白 | 第15-16页 |
| ·小麦蛋白 | 第16页 |
| ·大米蛋白 | 第16页 |
| 2 脱酰胺作用 | 第16-20页 |
| ·化学脱酰胺 | 第17-18页 |
| ·酶解脱酰胺 | 第18-20页 |
| 3 蛋白质谷氨酰胺酶的研究概况 | 第20-27页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的发现 | 第20页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的基因及氨基酸序列 | 第20-22页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的空间结构 | 第22-24页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的生物学活性 | 第24-27页 |
| 4 本课题的研究意义 | 第27-29页 |
| 第二章 蛋白质谷氨酰胺酶基因的人工合成 | 第29-41页 |
| 前言 | 第29页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第29-30页 |
| ·试剂与药品 | 第30页 |
| ·主要仪器和设备 | 第30页 |
| ·计算机分析软件 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-36页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶基因序列的优化 | 第30-31页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶基因寡核苷酸片段的设计 | 第31-32页 |
| ·重叠延伸PCR法合成PG基因 | 第32-33页 |
| ·PG基因的克隆与测序 | 第33页 |
| ·定点突变PCR | 第33-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-39页 |
| ·PG全长基因的人工合成 | 第36页 |
| ·PG全长基因的鉴定 | 第36-37页 |
| ·定点突变PCR的鉴定 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 蛋白质谷氨酰胺酶在大肠杆菌表达系统中的表达与活性检测 | 第41-63页 |
| 前言 | 第41-42页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| ·菌种和质粒 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器和设备 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·计算机分析软件 | 第43页 |
| ·常用试剂 | 第43-44页 |
| 2 方法与步骤 | 第44-54页 |
| ·重组表达载体pET32a-matPG的构建 | 第44-47页 |
| ·基因工程菌pET32a-matPG/BL21的构建 | 第47页 |
| ·基因工程菌pET32a-matPG/BL21的诱导表达 | 第47-49页 |
| ·重组蛋白的可溶性鉴定 | 第49页 |
| ·诱导温度和分子伴侣对重组蛋白可溶性的影响 | 第49-50页 |
| ·乳糖自诱导与IPTG诱导对菌体密度和重组蛋白表达率的比较 | 第50-51页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的表达与纯化 | 第51-53页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶活性的测定 | 第53-54页 |
| ·温度和pH值对蛋白质谷氨酰胺酶酶活的影响 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-61页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽序列的扩增 | 第54-55页 |
| ·重组表达载体pET32a-matPG的鉴定 | 第55页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及western blotting分析 | 第55-56页 |
| ·诱导温度和分子伴侣对重组蛋白可溶性的影响 | 第56-57页 |
| ·乳糖自诱导与IPTG诱导对菌体密度和重组蛋白表达率的比较 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第58-59页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶活性的测定 | 第59-61页 |
| ·温度和pH值对PG酶酶活的影响 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 蛋白质谷氨酰胺酶在枯草芽孢杆菌表达系统中的表达与活性检测 | 第63-102页 |
| 前言 | 第63-66页 |
| 第一节 大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHPW的构建及PG酶的表达与活性检测 | 第66-84页 |
| 1 材料 | 第66-67页 |
| ·菌种和质粒 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器和设备 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66-67页 |
| ·计算机分析软件 | 第67页 |
| 2 方法与步骤 | 第67-77页 |
| ·大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHPW的构建 | 第67-72页 |
| ·大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHPW的功能检测 | 第72-73页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的表达与活性检测 | 第73-77页 |
| ·重组表达载体pHPW-PG的构建 | 第73-75页 |
| ·基因工程菌pHPW-PG/DB403的构建 | 第75-76页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的制备 | 第76页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的活性检测 | 第76-77页 |
| 3 结果与分析 | 第77-84页 |
| ·基因片段的扩增 | 第77-78页 |
| ·大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHPW的鉴定 | 第78-79页 |
| ·大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHPW的功能检测 | 第79-80页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的表达与活性检测 | 第80-84页 |
| ·重组表达载体pHPW-PG的鉴定 | 第80-81页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的表达与检测 | 第81页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的活性检测 | 第81-84页 |
| 第二节 低温诱导型大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pCW的构建及PG酶的表达与活性检测 | 第84-102页 |
| 1 材料 | 第84-85页 |
| ·菌种和质粒 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84页 |
| ·主要仪器和设备 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84-85页 |
| ·计算机分析软件 | 第85页 |
| 2 方法与步骤 | 第85-92页 |
| ·DNA片段的设计与合成 | 第85-86页 |
| ·低温诱导型大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pCW的构建 | 第86-88页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的表达与活性检测 | 第88-92页 |
| ·重组表达载体pCW-PG的构建 | 第88-90页 |
| ·基因工程菌pCW-PG/DB403的构建 | 第90-91页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的制备 | 第91-92页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的活性检测 | 第92页 |
| 3 结果与分析 | 第92-99页 |
| ·质粒pHP13和DNA片段des-SamyQ鉴定 | 第92-93页 |
| ·低温诱导型大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pCW的鉴定 | 第93-94页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶在pCW中的表达与活性检测 | 第94-99页 |
| ·重组表达载体pCW-PG的鉴定 | 第94-95页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的表达与制备 | 第95-96页 |
| ·蛋白质谷氨酰胺酶的活性检测 | 第96-99页 |
| 4 讨论 | 第99-102页 |
| 参考文献 | 第102-109页 |
| 附录 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
