| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 第一章 麦芽糖α淀粉酶基因的克隆、表达及活性研究 | 第15-58页 |
| 第一节 麦芽糖α淀粉酶综述 | 第15-23页 |
| 1. 麦芽糖α淀粉酶的概述 | 第15-17页 |
| ·淀粉酶及其分类 | 第15-16页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶的基本性质 | 第16-17页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶基因的细菌来源 | 第17页 |
| 2. 麦芽糖α淀粉酶的应用 | 第17-19页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶在面粉工业方面的应用 | 第17-18页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶在淀粉糖化工业方面的应用 | 第18-19页 |
| 3. 本课题的研究背景和目的意义 | 第19-23页 |
| ·国内外研究进展 | 第19-21页 |
| ·本章研究内容 | 第21-23页 |
| 第二节 麦芽糖α淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及活性测定 | 第23-41页 |
| 1. 材料 | 第23-25页 |
| ·菌种和质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23页 |
| ·计算机分析软件 | 第23页 |
| ·溶液配制 | 第23-25页 |
| 2. 方法与步骤 | 第25-34页 |
| ·嗜热脂肪芽孢杆菌amyM的优化及合成 | 第25页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶在大肠杆菌DH5α中的克隆 | 第25-29页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第29-31页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶的活性检测 | 第31-33页 |
| ·包涵体的复性 | 第33-34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-41页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶基因amyM密码子的优化 | 第34-35页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶基因amyM的获得 | 第35-36页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌DH5α中的克隆 | 第36-37页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶在大肠杆菌中的诱导表达及可溶性分析 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的Western Blotting分析 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白Trx-M的可溶性表达鉴定 | 第39页 |
| ·麦芽糖α淀粉酶的活性检测 | 第39-41页 |
| 第三节 麦芽糖α淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆、表达及活性测定 | 第41-47页 |
| 1. 材料 | 第41页 |
| ·菌种和质粒 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·溶液配制 | 第41页 |
| 2. 方法与步骤 | 第41-44页 |
| ·重组质粒pWB980-amyM的构建 | 第41-44页 |
| ·pWB980-amyM/1A474的表达 | 第44页 |
| ·枯草芽孢杆菌中麦芽糖α淀粉酶的活性 | 第44页 |
| 3. 结果 | 第44-47页 |
| ·重组表达质粒pWB980-amyM的构建 | 第44-46页 |
| ·枯草芽孢杆菌中麦芽糖α淀粉酶活性的测定 | 第46-47页 |
| 第四节 产麦芽糖α淀粉酶重组菌株发酵条件的优化 | 第47-58页 |
| 1. 培养基的配制 | 第47页 |
| 2. 培养条件 | 第47-48页 |
| ·不同培养基对重组菌生长及酶活的影响 | 第47页 |
| ·pH对重组菌生长及酶活的影响 | 第47-48页 |
| ·通气量对重组菌生长及酶活的影响 | 第48页 |
| ·接种量对重组菌生长及酶活的影响 | 第48页 |
| 3. 营养条件 | 第48-49页 |
| ·氮源对重组菌生长及酶活的影响 | 第48-49页 |
| ·碳源对重组菌生长及酶活的影响 | 第49页 |
| ·促进剂对重组菌生长及酶活的影响 | 第49页 |
| 4. 结果及分析 | 第49-55页 |
| ·不同培养基对重组菌生长及酶活的影响 | 第49-50页 |
| ·pH对重组菌生长及酶活的影响 | 第50-51页 |
| ·通气量对重组菌生长及酶活的影响 | 第51-52页 |
| ·接种量对重组菌生长及酶活的影响 | 第52-53页 |
| ·氮源对重组菌生长及酶活的影响 | 第53页 |
| ·碳源对重组菌生长及酶活的影响 | 第53-55页 |
| ·促进剂对重组菌生长及酶活的影响 | 第55页 |
| 5. 讨论 | 第55-58页 |
| 第二章 谷氨酰内切酶基因的克隆、表达与性质研究 | 第58-87页 |
| 第一节 谷氨酰内切酶综述 | 第58-68页 |
| 1. 谷氨酰内切酶的含义 | 第58-63页 |
| ·丝氨酸蛋白酶及其分类 | 第58-60页 |
| ·谷氨酰内切酶的基本性质 | 第60-63页 |
| ·谷氨酰内切酶基因的来源 | 第63页 |
| 2. 谷氨酰内切酶的应用 | 第63-65页 |
| ·功能性短肽的制备 | 第63-64页 |
| ·水解肽序列 | 第64页 |
| ·糖化血红蛋白检测中的应用 | 第64-65页 |
| 3. 本课题的研究背景和意义 | 第65-68页 |
| ·国内外研究进展 | 第65-67页 |
| ·本课题研究内容 | 第67-68页 |
| 第二节 谷氨酰内切酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及活性测定 | 第68-87页 |
| 1. 材料 | 第68页 |
| ·菌种和质粒 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68页 |
| ·主要仪器和设备 | 第68页 |
| 2. 方法与步骤 | 第68-78页 |
| ·地衣芽孢杆菌ATCC14580的培养 | 第68页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第68-69页 |
| ·基因的扩增 | 第69-70页 |
| ·质粒pET28a(+)的提取 | 第70页 |
| ·重组质粒pET28a(+)—GE的构建 | 第70-73页 |
| ·重组菌株的诱导表达情况 | 第73-74页 |
| ·提高重组蛋白的可溶性 | 第74-75页 |
| ·粗酶液的纯化 | 第75-77页 |
| ·谷氨酰内切酶的活性检测 | 第77页 |
| ·谷氨酰内切酶酶学性质分析 | 第77-78页 |
| 3. 结果与分析 | 第78-85页 |
| ·谷氨酰内切酶基因GE的克隆、表达与鉴定 | 第78-83页 |
| ·重组谷氨酰内切酶的酶学性质分析 | 第83-85页 |
| 4. 讨论 | 第85-87页 |
| 总结 | 第87-88页 |
| 本研究的特色及展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 附录 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
