| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-17页 |
| ·SAMHD1 的结构 | 第11-12页 |
| ·SAMHD1 的功能 | 第12-13页 |
| ·SAMHD1 与艾氏综合征 | 第13-14页 |
| ·SAMHD1 蛋白抗病毒作用机制 | 第14-15页 |
| ·单克隆抗体技术的应用及发展前景 | 第15页 |
| ·研究的目的和意义 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-28页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·细胞、质粒及菌株 | 第17页 |
| ·主要试剂及实验动物 | 第17页 |
| ·培养基和主要溶液的配制 | 第17-18页 |
| ·仪器设备 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-28页 |
| ·SAMHD1 基因重组质粒的构建 | 第18-20页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第20-21页 |
| ·人、马、猴 pcDNA-SAMHD1 重组质粒在 293T 细胞中的表达鉴定 | 第21页 |
| ·重组质粒 pET-huSAMHD1 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第21-22页 |
| ·SAMHD1 蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第22-25页 |
| ·单克隆抗体针对 SAMHD1 结构域抗原表位的鉴定 | 第25-28页 |
| 3 结果 | 第28-40页 |
| ·SAMHD1 基因的 PCR 扩增 | 第28页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·人、马、猴 pcDNA-SAMHD1 重组质粒在 293T 细胞中的表达鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组 huSAMHD1 蛋白的诱导表达 | 第30-32页 |
| ·重组 huSAMHD1 蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第30页 |
| ·原核表达产物 SAMHD1 蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·原核表达产物 SAMHD1 蛋白的 Western blot 分析 | 第31-32页 |
| ·单克隆抗体的制备与鉴定 | 第32-36页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞株的获得 | 第32页 |
| ·单克隆抗体的 western blot 鉴定 | 第32-34页 |
| ·四株 MAb 免疫球蛋白亚类的鉴定 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 | 第34-35页 |
| ·3C3 MAb 腹水的纯化及其腹水效价的测定 | 第35页 |
| ·SAMHD1 在不同细胞中的表达鉴定 | 第35-36页 |
| ·3C3 MAb 针对 SAMHD1 结构域抗原表位的初步鉴定 | 第36-40页 |
| ·SAMHD1 基因的两个结构域的 PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·重组原核表达质粒 pET-SAMHD1-SAM 和 pET-SAMHD1-HD 的双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·SAMHD1 两个结构蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第38-39页 |
| ·3C3 MAb 针对 SAMHD1 结构域抗原表位的初步鉴定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·重组质粒的构建及诱导表达 | 第40页 |
| ·四株单抗与抗原的反应活性 | 第40-41页 |
| ·3C3 MAb 的种属特异性分析 | 第41页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选及腹水的制备 | 第41页 |
| ·SAMHD1 蛋白主要功能区的鉴定 | 第41-42页 |
| ·3C3 MAb 的应用前景 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第51页 |
