| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-36页 |
| 1.分子生物技术与我国烟草业 | 第8-11页 |
| ·我国烟草生产概况 | 第8-9页 |
| ·国内外烟草生物技术研究概况 | 第9-11页 |
| ·烟草生物技术研究和应用展望 | 第11页 |
| 2.侧芽与顶端优势研究进展 | 第11-22页 |
| ·顶端优势 | 第12-15页 |
| ·顶端优势的发生机理 | 第12-15页 |
| ·营养假说 | 第12-13页 |
| ·生长素抑制假说 | 第13-14页 |
| ·细胞分裂素在顶端优势中的作用 | 第14-15页 |
| ·原发优势假说 | 第15页 |
| ·侧芽发生的相关基因的研究 | 第15-19页 |
| ·抑制侧芽生长的基因的研究 | 第16-17页 |
| ·侧芽休眠相关基因的研究 | 第17-18页 |
| ·促进侧芽生长的基因的研究 | 第18-19页 |
| ·侧芽调控中的二级信号 | 第19-22页 |
| 3.高等植物启动子研究进展 | 第22-26页 |
| ·组成型启动子 | 第22-23页 |
| ·CaMV35S启动子 | 第22-23页 |
| ·Nos和Ocs启动子 | 第23页 |
| ·Actl启动子： | 第23页 |
| ·组织或器官特异性启动子 | 第23页 |
| ·诱导型启动子： | 第23-26页 |
| ·光诱导表达启动子 | 第24页 |
| ·热诱导表达启动子 | 第24页 |
| ·酒精诱导基因表达系统： | 第24-25页 |
| ·创伤诱导表达启动子： | 第25-26页 |
| 4.RNAi技术研究进展 | 第26-31页 |
| ·RNAi的机制 | 第26-27页 |
| ·RNAi的必需基因 | 第27页 |
| ·RNAi技术 | 第27-29页 |
| ·编码区RNAi和启动子区RNAi技术 | 第28-29页 |
| ·siRNA的获得方法 | 第29页 |
| ·RNAi的应用 | 第29-31页 |
| ·高通量研究基因功能 | 第29-30页 |
| ·研究信号转导通路的新工具 | 第30页 |
| ·生物进化 | 第30页 |
| ·基因治疗的新方法 | 第30-31页 |
| 5.生物安全研究进展 | 第31-36页 |
| ·选用安全的标记基因 | 第31-33页 |
| ·6-磷酸甘露糖异构酶基因 | 第31-32页 |
| ·绿色荧光蛋白基因(GFP) | 第32页 |
| ·木糖异构酶基因 | 第32页 |
| ·谷氨酸-1-半醛转氨酶基因 | 第32-33页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶基因 | 第33页 |
| ·无选择标记转基因植株的获得 | 第33-36页 |
| ·共转化法 | 第34页 |
| ·双T-DNA边界序列以及双右边界T—DNA转化法 | 第34页 |
| ·位点特异性重组转化系统 | 第34-36页 |
| 第一章：烟草NtPSA基因的克隆及转化烟草的研究 | 第36-52页 |
| 1.材料与方法 | 第36-46页 |
| ·材料试剂 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-46页 |
| ·PSA基因的克隆 | 第36-41页 |
| ·表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·三亲交配法转化农杆菌 | 第43-44页 |
| ·农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第44-45页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-52页 |
| ·烟草顶芽RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增及克隆载体构建 | 第47页 |
| ·DNA序列测定 | 第47-48页 |
| ·pPP表达载体的构建 | 第48页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第48-52页 |
| 第二章：拟南芥SPS基因的克隆及转化烟草的研究 | 第52-60页 |
| 1.材料与方法 | 第52-56页 |
| ·材料、试剂 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| ·拟南芥SPS基因的克隆 | 第52-54页 |
| ·表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·表达载体导入农杆菌及转化烟草 | 第56页 |
| 2.结果与分析： | 第56-60页 |
| ·PCR扩增产物分析 | 第56页 |
| ·克隆载体构建 | 第56-57页 |
| ·DNA序列测定 | 第57页 |
| ·pPS表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第58-60页 |
| 第三章：豌豆PsADl基因的克隆及双右边界表达载体的构建 | 第60-68页 |
| 1.材料与方法 | 第60-64页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·植物材料 | 第60页 |
| ·菌株、载体、主要生化试剂 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-64页 |
| ·豌豆基因组DNA提取 | 第60页 |
| ·PsAD1基因的PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·PCR目的片段的克隆及重组子筛选 | 第61页 |
| ·表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·双右边界载体的构建 | 第63-64页 |
| 2.结果与分析 | 第64-68页 |
| ·PCR扩增产物分析 | 第64页 |
| ·重组子质粒pPSAD1的双酶切 | 第64-65页 |
| ·DNA测序测定 | 第65-66页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第66-67页 |
| ·双右边界载体系统pDRB-pPD构建结果： | 第67-68页 |
| 第四章：烟草TLS基因片断的克隆、RNAi载体的构建以及转化烟草的研究 | 第68-81页 |
| 1.材料与方法 | 第68-77页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·菌株、载体 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-77页 |
| ·烟草基因组DNA提取 | 第68页 |
| ·TLS基因的PCR扩增 | 第68-69页 |
| ·PCR目的片段的克隆及重组子筛选 | 第69-72页 |
| ·TLS基因在烟草各部位的表达分析 | 第72页 |
| ·RNAi表达载体(pHANBIAL-TLS-PART27)的构建 | 第72-74页 |
| ·三亲交配法转化农杆菌 | 第74-76页 |
| ·农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第76-77页 |
| 2.结果与分析 | 第77-81页 |
| ·PCR扩增产物分析 | 第77页 |
| ·TLS基因cDNA片断序列测定与分析： | 第77-78页 |
| ·烟草各组织TLS基因表达分析 | 第78-79页 |
| ·中间载体pHANNIBAL的构建 | 第79页 |
| ·植物表达载体pHANBIAL-TLS-PART27的构建 | 第79-80页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第80-81页 |
| 讨论 | 第81-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-98页 |
| 缩略词表 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
