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鹅RIG-I在抗NDV先天性免疫中的作用

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第一章 引言第15-23页
   ·新城疫病毒简介第15-16页
   ·先天性免疫系统简介第16-17页
   ·RIG-I 样受体介导的信号转导第17-21页
     ·RLR 家族概述第17页
     ·RLR 对病毒的识别第17-19页
     ·RLR 介导的信号传导第19-20页
     ·RLR 与病毒蛋白第20-21页
   ·干扰素简介第21-22页
     ·干扰素家族成员第21页
     ·病毒诱导 I 型 IFN 基因表达的调控第21-22页
     ·I 型 IFN 诱导的信号通路转导第22页
   ·NDV 先天性免疫相关研究现状第22-23页
第二章 鹅 RLR 相关基因的克隆及序列分析第23-36页
   ·材料第23-24页
     ·动物材料第23页
     ·病毒和菌株第23页
     ·载体和分子生物学试剂第23页
     ·主要仪器第23页
     ·主要缓冲液及试剂配制第23-24页
   ·方法第24-28页
     ·CEF,DEF,GEF 的制备第24页
     ·NDV 病毒感染 CEF,DEF,GEF第24页
     ·细胞 RNA 提取(Trizol 法)及反转录第24-25页
     ·鹅 RIG-I 基因及其 CARD 区的扩增及真核表达质粒构建第25-27页
     ·鹅 MDA5 基因的扩增及真核表达质粒构建第27-28页
     ·鹅 RIG-I/MDA5 基因序列分析第28页
   ·结果第28-35页
     ·CEF,DEF,GEF 中 RIG-I 的初步鉴定第28-29页
     ·鹅 RIG-I 基因及其 CARD 基因扩增结果第29-30页
     ·鹅 RIG-I 基因及其 CARD 基因真核表达质粒的鉴定第30-31页
     ·鸡,鸭,鹅中 MDA5 的初步鉴定第31-32页
     ·鹅 MDA5 基因 overlap 扩增结果第32页
     ·鹅 MDA5 基因真核表达质粒的鉴定第32-33页
     ·gRIG-I full,gMDA5 full 基因序列分析第33-35页
   ·讨论第35-36页
第三章 外源性鹅 RIG-I 转染细胞对 NDV 复制的影响第36-46页
   ·材料第36页
     ·毒株,细胞和质粒第36页
     ·载体和分子生物学试剂第36页
     ·主要仪器第36页
   ·方法第36-40页
     ·质粒的提取转化第36页
     ·质粒的转染第36-37页
     ·阳性刺激物转染第37页
     ·病毒感染第37页
     ·病毒感染力的滴定(TCID50 的测定)第37页
     ·细胞 RNA 提取(Trizol 法)及 Real-time PCR第37-38页
     ·双荧光素酶报告系统构建及检测第38-40页
     ·结果第40-45页
     ·Real-time PCR 引物优化第40-41页
     ·5’ppp-dsRNA 刺激鹅 RIG-I 可上调 IFN-β的表达第41页
     ·过表达鹅 RIG-I 对 NDV 复制的影响第41-43页
     ·鸡 IFN-β基因启动子序列的扩增及荧光素酶报告质粒的鉴定第43页
     ·外源性鹅 RIG-I 转染 DF-1 对 NDV 复制的影响第43-45页
   ·讨论第45-46页
第四章 内源性鹅 RIG-I 在抗 NDV 感染中的作用第46-55页
   ·材料第46页
     ·动物材料第46页
     ·病毒和菌株第46页
     ·载体和分子生物学试剂第46页
     ·主要仪器第46页
   ·方法第46-49页
     ·GEF 的制备第46-47页
     ·NDV 病毒感染 GEF第47页
     ·病毒感染力的滴定(TCID50 的测定)第47页
     ·细胞 RNA 提取(Trizol 法)及 Real-time PCR第47-48页
     ·动物试验第48-49页
   ·结果第49-54页
     ·Real-time PCR 引物优化第49页
     ·GEF 感染 NDV 后 gRIG-I mRNA 检测第49-50页
     ·GEF 感染 NDV 后病毒滴度检测第50-51页
     ·鹅 NDV 母源抗体检测第51页
     ·RIG-I 在正常鹅体内的分布第51页
     ·鹅感染 NDV 后肺和气囊组织中的 gRIG-I mRNA 上调第51-53页
     ·肺和气囊组织中病毒 ELD50 检测第53-54页
   ·讨论第54-55页
第五章 结论第55-56页
参考文献第56-62页
致谢第62-63页
作者简历第63页

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