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鸭疫里默氏杆菌免疫蛋白质组学及载铁体相互作用蛋白基因缺失株的构建

摘要第1-7页
Abstract第7-8页
目录第8-13页
第一章 引言第13-20页
   ·鸭疫里默氏杆菌的研究进展第13-20页
     ·生物被膜第13-14页
     ·基因组全序列的发表第14-15页
     ·毒力因子第15-17页
     ·耐药性与基因盒-整合子系统第17-19页
     ·鸭疫里默氏杆菌检测方法研究进展第19页
     ·展望第19-20页
第二章 鸭疫里默氏杆菌免疫蛋白质组学研究第20-37页
   ·材料和方法第20-22页
     ·菌株和培养条件第20页
     ·主要试剂第20-21页
     ·主要培养基第21页
     ·主要缓冲液及试剂配制第21页
     ·主要仪器及软件第21-22页
   ·试验部分第22-26页
     ·鸭疫里默氏杆菌的复苏与培养第22页
     ·鸭疫里默氏杆菌抗血清的制备第22-23页
     ·鸭疫里默氏杆菌全菌蛋白的样品制备及定量第23页
     ·二维电泳第23-24页
     ·Western blotting第24页
     ·胶内酶解第24-25页
     ·MALDI-TOF-MS第25页
     ·数据库检索及生物信息学分析第25页
     ·验证蛋白的免疫原性第25-26页
   ·试验结果第26-35页
     ·鸭疫里默氏杆菌抗血清效价测定结果第26页
     ·鸭疫里默氏杆菌 Th4 全菌蛋白 2-D 电泳结果第26-27页
     ·western blot 结果第27-30页
     ·蛋白点的鉴定第30-33页
     ·免疫原性蛋白质生物信息学分析第33-34页
     ·Western blot 验证乙酰 CoA 乙酰转移酶(acat)和翻译延伸因子 2(ef-g)免疫原性第34-35页
   ·讨论第35-37页
第三章 鸭疫里默氏杆菌载铁体相互作用蛋白缺失株的构建第37-64页
   ·材料第37-40页
     ·菌株和培养条件第37-38页
     ·主要载体、酶及试剂第38页
     ·主要培养基第38页
     ·抗生素及使用浓度第38页
     ·常见缓冲液及试剂配制第38-39页
     ·主要仪器设备第39页
     ·PCR 引物第39-40页
   ·试验方法第40-48页
     ·不同血清型鸭疫里默氏杆菌载铁体相互作用蛋白基因(Siderophore-interacting protein, sip)的检测、克隆与序列分析第40-41页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3 sip 基因同源性左右臂片段的克隆第41-42页
     ·壮观霉素抗性基因(Spc)的扩增第42-43页
     ·重组质粒 pGEM-T easy-LSR 的构建第43页
     ·自杀性重组质粒 pMEG-375-LSR 的构建第43-44页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3 株△sip 基因缺失株的筛选及鉴定第44-45页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3△sip 基因缺失株的生物学特性第45页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3△sip 基因缺失株的基因互补试验第45-48页
     ·SIP 基因缺失对生物被膜形成的影响第48页
     ·载铁体相互作用蛋白(SIP)在鸭疫里默氏杆菌 CH3 对铁摄取中的作用分析第48页
     ·铁在 HXb2 株生长中的作用第48页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3、CH3△sip 基因缺失株和 CH3△sip 基因缺失回复株粘附入侵试验第48页
   ·试验结果第48-62页
     ·不同血清型鸭疫里默氏杆菌的 sip 基因的检测及序列比较第48-50页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3 sip 基因同源性左右臂片段的克隆第50-51页
     ·壮观霉素抗性基因(Spc)的扩增第51页
     ·重组质粒 pGEM-T easy-LSR 的构建第51-53页
     ·构建自杀性重组质粒 pMEG-375-LSR第53页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3 株△sip 基因缺失株的筛选及鉴定第53-55页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3△sip 基因缺失株的生物学特性第55-56页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3△sip 基因缺失株的基因互补试验第56-59页
     ·SIP 基因缺失对生物被膜形成的影响第59页
     ·铁载体相互作用蛋白(SIP)在鸭疫里默氏杆菌 CH3 株铁的摄取过程中起重要作用第59-61页
     ·鸭疫里默氏杆菌 CH3、CH3△sip 基因缺失株和 CH3△sip 基因缺失回复株粘附与入侵试验第61-62页
   ·讨论第62-64页
全文结论第64-65页
参考文献第65-71页
致谢第71-72页
作者简历第72页

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