| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 文献综述 | 第8-33页 |
| 1 食品中常见致病菌及常规的检测技术 | 第8-12页 |
| ·食源性致病菌危害的严重性 | 第8-9页 |
| ·常见的食源性致病菌 | 第9-11页 |
| ·食源性致病菌检测技术应用的现状 | 第11-12页 |
| ·上述的检测技术应用的不足 | 第12页 |
| 2 实时荧光PCR技术简介 | 第12-20页 |
| ·实时荧光PCR及其定量检测技术的原理 | 第13-19页 |
| ·荧光探针的技术原理 | 第13-14页 |
| ·实时荧光PCR所用探针 | 第14-18页 |
| ·实时荧光PCR的特点 | 第18-19页 |
| ·实时荧光PCR技术应用的现状 | 第19-20页 |
| ·实时荧光PCR技术在致病菌方面的应用现状 | 第19-20页 |
| ·实时荧光PCR技术在其他方面的应用现状 | 第20页 |
| 3 实时荧光RT-PCR技术在食源性致病菌检测方面的应用 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR技术的原理 | 第20-21页 |
| ·实时荧光RT-PCR技术鉴别食源性致病菌死活状态的原理 | 第21页 |
| 4 DNA芯片技术简介 | 第21-33页 |
| ·DNA芯片技术的原理 | 第21-22页 |
| ·DNA芯片技术的种类 | 第22-26页 |
| ·按载体材料分类# | 第22页 |
| ·按点样方式分类 | 第22-24页 |
| ·按探针种类分类 | 第24页 |
| ·按用途分类 | 第24-26页 |
| ·DNA芯片的应用范围及现状 | 第26-31页 |
| ·DNA芯片在微生物方面的应用 | 第27-30页 |
| ·DNA芯片在其他方面的应用 | 第30-31页 |
| ·DNA芯片的发展前景 | 第31-33页 |
| 实验材料和基本方法 | 第33-39页 |
| 1 实验材料 | 第33-36页 |
| ·实验菌株 | 第33-34页 |
| ·实验试剂 | 第34-35页 |
| ·细菌培养基 | 第35页 |
| ·细菌基因组DNA提取试剂 | 第35页 |
| ·PCR试剂 | 第35页 |
| ·RT-PCR试剂 | 第35页 |
| ·供试载体、宿主细菌及培养基 | 第35页 |
| ·DNA芯片试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35-36页 |
| ·PCR仪 | 第35-36页 |
| ·DNA芯片相关仪器 | 第36页 |
| ·其他仪器 | 第36页 |
| 2 基本实验方法 | 第36-39页 |
| ·细菌培养 | 第36页 |
| ·细菌基因组DNA提取 | 第36-37页 |
| ·革兰氏阳性细菌基因组DNA的提取 | 第37页 |
| ·革兰氏阴性细菌基因组DNA的提取 | 第37页 |
| ·细菌基因组DNA提取结果检测 | 第37-39页 |
| ·细菌基因组DNA的电泳检测 | 第37-38页 |
| ·细菌基因组DNA的浓度和纯度测定 | 第38-39页 |
| 实验方法 | 第39-110页 |
| 1 运用实时荧光PCR技术检测食源性致病菌的研究 | 第39-62页 |
| ·运用实时荧光PCR技术定性检测八种食源性致病菌的研究 | 第39-45页 |
| ·实时荧光PCR检测的八种食源性致病菌 | 第39页 |
| ·实时荧光PCR检测用的引物和探针序列 | 第39-40页 |
| ·待检菌株的培养 | 第40页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·实时荧光PCR检测八种食源性致病菌 | 第41页 |
| ·八种食源性致病菌的实时荧光PCR检测结果 | 第41-45页 |
| ·运用实时荧光PCR技术定量检测食源性致病菌的研究 | 第45-58页 |
| ·模拟污染样品的制备 | 第45页 |
| ·单增李氏菌的计数 | 第45页 |
| ·单增李氏菌模板DNA的提取 | 第45页 |
| ·单增李氏菌DNA检测的引物和探针 | 第45-46页 |
| ·实时荧光PCR定量检测食品中的单增李氏菌 | 第46-49页 |
| ·运用实时荧光PCR技术定量检测单增李氏菌的结果 | 第49-58页 |
| ·运用实时荧光RT-PCR检测食品中活性单增李氏菌的研究 | 第58-62页 |
| ·单增李氏菌的计数 | 第58页 |
| ·单增李氏菌模板RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·单增李氏菌RNA检测用引物和探针 | 第59页 |
| ·RNA模板的处理 | 第59页 |
| ·定性RT-PCR检测食品中的活体单增李氏菌 | 第59-60页 |
| ·实时荧光RT-PCR检测食品中的活体单增李氏菌 | 第60页 |
| ·实时荧光RT-PCR检测食品中活体单增李氏菌的结果 | 第60-62页 |
| 2 运用DNA芯片技术检测食源性致病菌的研究 | 第62-110页 |
| ·运用DNA芯片技术检测的八种食源性致病菌 | 第62页 |
| ·DNA芯片检测用的引物和探针 | 第62页 |
| ·DNA芯片的制备 | 第62-64页 |
| ·引物和氨基化探针的制备 | 第63-64页 |
| ·芯片探针点样液的配制 | 第64页 |
| ·芯片点样及后处理 | 第64页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第64-65页 |
| ·PCR扩增 | 第65页 |
| ·DNA芯片的杂交 | 第65-66页 |
| ·杂交过程 | 第65-66页 |
| ·杂交结果的检测 | 第66页 |
| ·DNA芯片的敏感度实验 | 第66-67页 |
| ·DNA芯片的重复性和稳定性实验 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-110页 |
| ·DNA芯片检测用引物和探针的研究设计 | 第67-70页 |
| ·十五种细菌的PCR检测 | 第70-72页 |
| ·DNA芯片检测结果 | 第72-88页 |
| ·探针的BLAST比对结果 | 第88页 |
| ·探针的敏感度实验结果 | 第88-100页 |
| ·重复性与稳定性实验 | 第100-110页 |
| 讨论 | 第110-120页 |
| 1 关于运用实时荧光PCR技术检测食源性致病菌方法 | 第110-115页 |
| ·关于运用实时荧光PCR技术定性检测食源性致病菌的方法 | 第110-112页 |
| ·关于扩增的片段和探针的特异性 | 第110页 |
| ·实时荧光PCR定性检测方法与常规检测和其他分子生物学方法的比较 | 第110-112页 |
| ·关于运用实时荧光PCR技术定量检测食源性致病菌的方法 | 第112-114页 |
| ·关于实时荧光PCR方法定量检测食源性致病菌的优越性 | 第112-113页 |
| ·关于实时荧光PCR定量检测的标准曲线的重复性和稳定性 | 第113-114页 |
| ·关于三种标准曲线的灵敏度 | 第114页 |
| ·关于运用实时荧光RT-PCR技术检测食源性致病菌方法 | 第114-115页 |
| ·关于提取RNA和RNA提取后处理 | 第114页 |
| ·关于实时荧光RT-PCR技术检测食源性致病菌方法的优越性 | 第114-115页 |
| 2 关于运用DNA芯片技术检测食源性致病菌方法 | 第115-120页 |
| ·关于革兰氏阳性细菌破壁 | 第115页 |
| ·选取的引物的通用性和探针的特异性 | 第115-117页 |
| ·关于杂交图像的信号交叉 | 第117页 |
| ·关于DNA芯片的灵敏度 | 第117-118页 |
| ·关于DNA芯片的重复性和稳定性 | 第118-119页 |
| ·关于DNA芯片检测食源性致病菌方法的优越性 | 第119-120页 |
| 结论与展望 | 第120-126页 |
| 1 主要结论 | 第120-121页 |
| ·实时荧光PCR技术是快速鉴定检测食源性致病菌的新技术 | 第120页 |
| ·实时荧光PCR技术可以快速准确地对食源性致病菌进行定量检测 | 第120页 |
| ·实时荧光RT-PCR技术是活性检测食源性致病菌的可靠技术 | 第120页 |
| ·DNA芯片是高通量快速鉴定检测八种食源性致病菌的最新技术 | 第120-121页 |
| 2 解决的关键技术问题和创新点 | 第121-123页 |
| ·本论文解决的关键技术问题 | 第121-122页 |
| ·本论文的创新点 | 第122-123页 |
| 3 本论文存在的不足之处 | 第123-124页 |
| 4 有待于进一步开展的工作 | 第124-126页 |
| 英文摘要 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-136页 |
| 致谢 | 第136-138页 |
