第1章 综述 | 第1-20页 |
1.1 蕲蛇研究与应用进展 | 第9-11页 |
1.1.1 蛇与蛇毒简介 | 第9页 |
1.1.2 蕲蛇蛇毒的研究概况 | 第9-11页 |
1.1.2.1 理化性质 | 第9-10页 |
1.1.2.2 研究概况 | 第10-11页 |
1.1.2.3 开发与应用 | 第11页 |
1.2 蛇毒对凝血系统的影响 | 第11-14页 |
1.2.1 具有凝血功能的组分 | 第12-13页 |
1.2.2 具有抗凝血功能的组分 | 第13-14页 |
1.3 自降解蛋白质研究概况 | 第14-18页 |
1.3.1 蛋白质自降解特性 | 第14-15页 |
1.3.2 已知的蛋白质自降解原理 | 第15-18页 |
1.4 本课题的提出及目的 | 第18-20页 |
第2章 材料与方法 | 第20-40页 |
2.1 实验材料 | 第20页 |
2.2 课题流程 | 第20页 |
2.3 实验方法 | 第20-40页 |
2.3.1 自降解蛋白质及其降解产生组分的分离与纯化方法 | 第20-26页 |
2.3.1.1 嗜硫色谱法 | 第21-23页 |
2.3.1.2 离子交换色谱法 | 第23-24页 |
2.3.1.3 凝胶过滤色谱法 | 第24-26页 |
2.3.2 蕲蛇蛇毒成分分析法 | 第26-33页 |
2.3.2.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第26-29页 |
2.3.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) | 第29-31页 |
2.3.2.3 毛细管液相色谱法 | 第31-32页 |
2.3.2.4 蛋白质含量测定(Folin-酚法) | 第32-33页 |
2.3.3 蕲蛇蛇毒中自降解蛋白质的表征 | 第33-38页 |
2.3.3.1 纯度鉴定 | 第33-34页 |
2.3.3.2 分子量鉴定 | 第34页 |
2.3.3.3 自降解性质鉴定 | 第34-35页 |
2.3.3.4 抗凝活性鉴定 | 第35-36页 |
2.3.3.5 蛋白酶活性表征 | 第36-38页 |
2.3.3.6 中性糖含量测定 | 第38页 |
2.3.4 一级结构测定 | 第38-40页 |
第3章 结果与讨论 | 第40-62页 |
3.1 蕲蛇蛇毒中自降解蛋白质的发现 | 第40-41页 |
3.2 降解产生组分的分离纯化 | 第41-42页 |
3.3 自降解蛋白质的分离纯化 | 第42-50页 |
3.3.1 嗜硫色谱的初步分离 | 第42-45页 |
3.3.1.1 不同缓冲体系的影响 | 第42页 |
3.3.1.2 缓冲液pH的影响 | 第42-43页 |
3.3.1.3 缓冲液盐浓度的影响 | 第43-45页 |
3.3.2 离子交换色谱的进一步纯化 | 第45-50页 |
3.3.2.1 离子交换柱的选择 | 第45-46页 |
3.3.2.2 缓冲液体系的选择 | 第46-47页 |
3.3.2.3 洗脱条件的选择 | 第47-50页 |
3.4 自降解蛋白质的表征 | 第50-59页 |
3.4.1 纯度鉴定及分子量标定 | 第50-53页 |
3.4.1.1 纯度鉴定 | 第50页 |
3.4.1.2 分子量标定 | 第50-53页 |
3.4.2 自降解特性的研究 | 第53-55页 |
3.4.2.1 保温时间对降解速度的影响 | 第53页 |
3.4.2.2 pH对降解速度的影响 | 第53-54页 |
3.4.2.3 温度对降解速度的影响 | 第54-55页 |
3.4.3 抗凝血活性的测定 | 第55-57页 |
3.4.3.1 pH对抗凝血活性的影响 | 第56页 |
3.4.3.2 温度对抗凝血活性的影响 | 第56页 |
3.4.3.3 保温时间对抗凝血活性的影响 | 第56-57页 |
3.4.4 蛋白酶活性的测定 | 第57-59页 |
3.4.4.1 pH对蛋白酶活性的影响 | 第58页 |
3.4.4.2 温度对蛋白酶活性的影响 | 第58页 |
3.4.4.3 保温时间对蛋白酶活性的影响 | 第58-59页 |
3.4.4.4 抑制剂 | 第59页 |
3.4.5 HQ-5中中性糖含量测定 | 第59页 |
3.5 HQ-5与TSK-2的性质对比 | 第59-60页 |
3.6 TSK-2的序列比较与分析 | 第60-62页 |
第4章 总结与展望 | 第62-65页 |
4.1 总结 | 第62-63页 |
4.2 展望 | 第63-65页 |
参考文献 | 第65-73页 |
附录A 自降解组分的毛细管电泳图 | 第73-77页 |
附录B TSK-2的N-端序列 | 第77-81页 |
附录C TSK-2的多序列比较 | 第81-83页 |