英文缩写注释 | 第1-13页 |
中文摘要 | 第13-16页 |
英文摘要 | 第16-19页 |
文献综述 | 第19-56页 |
综述一 猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第19-41页 |
1. 病原学 | 第19-25页 |
·PRRSV 的分类地位及生物学特性 | 第19-20页 |
·病毒基因组结构 | 第20-22页 |
·病毒基因组的转录及表达 | 第22页 |
·病毒基因组编码的主要蛋白 | 第22-25页 |
2. 流行病学 | 第25-26页 |
3. 临床症状 | 第26-27页 |
4. 病理变化 | 第27-29页 |
·临床病理学 | 第27页 |
·肉眼病变 | 第27页 |
·显微病变 | 第27-28页 |
·超微结构病变 | 第28-29页 |
5. 持续性感染 | 第29页 |
6. 病毒遗传变异 | 第29-33页 |
·生物性与抗原性变异 | 第30-31页 |
·致病性与病变差异 | 第31-32页 |
·基因型与遗传变异 | 第32-33页 |
7. 实验室诊断技术 | 第33-37页 |
·抗原学检测技术 | 第33-34页 |
·病毒分离技术 | 第33页 |
·免疫过氧化物酶技术(IPA) | 第33-34页 |
·免疫胶体金技术(IGSS) | 第34页 |
·免疫荧光抗体染色技术 | 第34页 |
·血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验 | 第34页 |
·血清学诊断技术 | 第34-36页 |
·免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) | 第34-35页 |
·间接荧光抗体试验(IFA) | 第35页 |
·血清中和试验(SN) | 第35页 |
·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第35-36页 |
·分子生物学诊断技术 | 第36-37页 |
·核酸探针技术 | 第36-37页 |
·RT-PCR 技术 | 第37页 |
8. 免疫应答 | 第37-38页 |
·体液免疫 | 第37-38页 |
·细胞免疫 | 第38页 |
9. 防治对策 | 第38-40页 |
10. 结语 | 第40-41页 |
综述二 猪繁殖与呼吸综合征病毒传染性 cDNA 分子克隆研究进展 | 第41-51页 |
1. 正链 RNA 病毒传染性cDNA 分子克隆的基本原理和构建方法 | 第41-43页 |
2. PRRSV 基因组和亚基因mRNA 的特征 | 第43-44页 |
3. PRRSV 传染性cDNA 分子克隆的构建 | 第44-46页 |
4. PRRSV 传染性cDNA 分子克隆的应用 | 第46-50页 |
·定点突变 | 第46-47页 |
·基因缺失 | 第47-48页 |
·表达外源序列 | 第48页 |
·构建多病毒嵌合体 | 第48-49页 |
·动物接种试验 | 第49-50页 |
5. 前景展望 | 第50-51页 |
综述三 猪断奶后多系统衰竭综合征诊断技术进展 | 第51-56页 |
1. 流行病学 | 第51页 |
2. 临床症状 | 第51-52页 |
3. 病理变化 | 第52页 |
4. 病毒分离 | 第52页 |
5. 聚合酶链式反应(PCR) | 第52-53页 |
6. 限制性片段长度多态性分析(RFLP) | 第53-54页 |
7. 免疫组织化学技术(IHC) | 第54页 |
8. 原位核酸杂交(ISH) | 第54页 |
9. 免疫荧光技术 | 第54-55页 |
10. 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第55-56页 |
试验研究 | 第56-125页 |
第一部分 PRRS 血清学调查与病毒分离鉴定 | 第56-66页 |
1. 引言 | 第57页 |
2. 材料与方法 | 第57-59页 |
·主要试剂和材料 | 第57-58页 |
·方法 | 第58-59页 |
·样品采集 | 第58页 |
·ELISA | 第58页 |
·病毒分离 | 第58页 |
·PRRSV 分离株毒价测定 | 第58页 |
·免疫荧光抗体试验 | 第58-59页 |
·动物回归试验 | 第59页 |
3. 结果 | 第59-64页 |
·ELISA 检测结果 | 第59页 |
·病毒分离结果 | 第59-60页 |
·PRRSV 分离株毒价测定 | 第60-61页 |
·免疫荧光抗体试验 | 第61-62页 |
·动物回归试验结果 | 第62-64页 |
·临床症状与病理剖检变化 | 第62-63页 |
·肺脏病理组织学变化 | 第63页 |
·病毒血症持续时间研究 | 第63-64页 |
4.讨论 | 第64-66页 |
第二部分 PRRSV 山东分离株分子遗传变异分析 | 第66-79页 |
1. 引言 | 第67页 |
2. 材料与方法 | 第67-70页 |
·主要试剂和材料 | 第67-68页 |
·病毒来源 | 第67页 |
·细胞、质粒和菌体 | 第67页 |
·试剂与酶类 | 第67-68页 |
·仪器 | 第68页 |
·试验方法 | 第68-70页 |
·样品准备与处理 | 第68页 |
·RT-PCR | 第68-70页 |
3. 结果 | 第70-77页 |
·PRRSV 分离株的基因扩增结果 | 第70-71页 |
·核苷酸和氨基酸序列分析 | 第71-77页 |
·ORF5 基因核苷酸及推导的氨基酸序列分析 | 第71-73页 |
·ORF6 基因核苷酸序列分析 | 第73-75页 |
·ORF7 基因核苷酸序列分析 | 第75-76页 |
·部分 Nsp2 基因推导氨基酸序列分析 | 第76-77页 |
4.讨论 | 第77-79页 |
第三部分 PRRS 油乳剂灭活疫苗研究 | 第79-102页 |
试验一 PRRSV SD1 株细胞培养生物学特性研究 | 第80-85页 |
1. 材料与方法 | 第80-81页 |
·主要试剂与材料 | 第80页 |
·方法 | 第80-81页 |
2. 结果 | 第81-83页 |
3. 讨论 | 第83-85页 |
试验二 PRRS 灭活疫苗(SD1 株)的研制与安全性试验 | 第85-90页 |
1. 材料与方法 | 第85-87页 |
·毒种 | 第85页 |
·制苗用毒液的繁殖 | 第85-86页 |
·灭活 | 第86页 |
·制苗 | 第86页 |
·成品检验 | 第86-87页 |
2. 疫苗试制及检验结果 | 第87-90页 |
·TCID_(50)测定 | 第87页 |
·灭活检验 | 第87-88页 |
·疫苗性状测定 | 第88页 |
·无菌检验 | 第88页 |
·甲醛、硫柳汞含量测定 | 第88页 |
·安全检验 | 第88-90页 |
试验三 PRRS 灭活疫苗(SD1 株)效力试验研究 | 第90-93页 |
1. 材料与方法 | 第90页 |
·材料 | 第90页 |
·方法 | 第90页 |
2. 结果 | 第90-92页 |
·仔猪免疫效力试验与攻毒保护试验 | 第90页 |
·母猪免疫效力试验与攻毒保护试验 | 第90-92页 |
3. 讨论 | 第92-93页 |
试验四 PRRS 灭活疫苗(SD1 株)免疫期与保存期试验 | 第93-96页 |
1. 材料与方法 | 第93页 |
·Marc-145 细胞 | 第93页 |
·MEM | 第93页 |
·小牛血清 | 第93页 |
·疫苗 | 第93页 |
·试验动物 | 第93页 |
·试验方法 | 第93页 |
2. 结果 | 第93-96页 |
·免疫期试验 | 第93-94页 |
·保存期试验 | 第94-96页 |
试验五 PRRS 灭活疫苗(SD1 株)田间试验 | 第96-99页 |
1. 材料与方法 | 第96页 |
2. 结果 | 第96-99页 |
试验六 PRRS 灭活疫苗区域试验报告 | 第99-102页 |
1. 材料 | 第99-100页 |
2. 结果 | 第100-102页 |
第四部分 从 PRRS 疑似病料中检测 PCV2 的研究 | 第102-110页 |
1. 引言 | 第103-104页 |
2. 材料与方法 | 第104-105页 |
·主要试剂材料 | 第104页 |
·方法 | 第104-105页 |
·病料收集 | 第104页 |
·PCR 检测圆环病毒2 型 | 第104-105页 |
·病毒电镜技术 | 第105页 |
·病毒遗传进化树分析 | 第105页 |
3. 结果 | 第105-108页 |
·PCR 检测结果 | 第105-106页 |
·病毒电镜观察 | 第106-107页 |
·病毒同源性比较和遗传进化树分析 | 第107-108页 |
4. 讨论 | 第108-110页 |
第五部分 应用 PRRSV 传染性克隆构建 PRRSV-PCV2 重组病毒的研究 | 第110-125页 |
1. 引言 | 第111页 |
2. 材料与方法 | 第111-117页 |
·主要试剂与材料 | 第111-112页 |
·试验方法 | 第112-117页 |
3. 结果 | 第117-124页 |
·PCR 扩增 PCV2 ORF2 研究 | 第117-118页 |
·PRRSV-PCV2 重组cDNA 克隆的 PCR 鉴定 | 第118页 |
·限制性酶切鉴定 PRRSV-PCV2 重组cDNA 克隆 | 第118-119页 |
·PRRSV-PCV2 序列分析 | 第119页 |
·Marc-145 细胞转染试验 | 第119-120页 |
·免疫荧光染色试验 | 第120-121页 |
·病毒噬斑形成单位(PFU)试验 | 第121-122页 |
·动物接种试验 | 第122-124页 |
4. 讨论 | 第124-125页 |
试验结论与创新点 | 第125-126页 |
参考文献 | 第126-142页 |
附录: 读博士学位期间发表论文情况 | 第142-143页 |
致谢 | 第143页 |