| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 一、前言 | 第18-21页 |
| 二、文献综述 | 第21-51页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的研究进展 | 第21-26页 |
| ·病原学特性 | 第22-23页 |
| ·流行病学特点 | 第23-24页 |
| ·临床症状 | 第24-25页 |
| ·发病机制及病理变化 | 第25-26页 |
| ·PRRSV 的持续感染 | 第26页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒（PPRSV）的分子生物学研究进展 | 第26-31页 |
| ·病毒的基因组结构 | 第26-27页 |
| ·病毒基因组的表达及所编码的蛋白 | 第27-30页 |
| ·病毒变异与基因重组 | 第30-31页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒（PPRSV）的免疫 | 第31-34页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的体液免疫 | 第32页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的细胞免疫 | 第32-34页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒（PPRSV）疫苗的研究进展 | 第34-39页 |
| ·灭活油剂疫苗 | 第35-36页 |
| ·弱毒疫苗 | 第36-38页 |
| ·基因疫苗 | 第38-39页 |
| ·提高基因工程疫苗免疫效果的策略 | 第39-51页 |
| ·CpG-ODN 的细胞激活作用 | 第40-41页 |
| ·CpG-ODN 的生物体内效应 | 第41-42页 |
| ·对天然免疫的刺激效果 | 第42-43页 |
| ·对获得性免疫反应的刺激效果 | 第43页 |
| ·CpG-ODN 免疫刺激增强作用的机制 | 第43-46页 |
| ·CpG-ODN 生物学活性的投递运载工具 | 第46-49页 |
| ·CpG ODN 作为新型免疫佐剂的前景及用途 | 第49-51页 |
| 三、实验部分 | 第51-90页 |
| 实验一：不同序列的CpG-ODN对猪体外免疫细胞免疫刺激作用的研究 | 第51-56页 |
| 1 材料与方法 | 第51-53页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·CpG-ODN 的合成 | 第51页 |
| ·试验动物 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·猪外周血、脾脏的采 | 第51页 |
| ·外周血淋巴细胞的分离培养 | 第51-52页 |
| ·脾脏免疫细胞的分离 | 第52页 |
| ·活力检测与计数 | 第52页 |
| ·外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞增殖试验（MTT 法） | 第52页 |
| ·数据处理 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-56页 |
| ·不同序列 CpG-ODN 对猪外周血淋巴细胞的刺激作用的结果分析 | 第53-54页 |
| ·不同序列CpG-ODN 对猪脾细胞的刺激作用的结果分析 | 第54-56页 |
| 实验二：含CpG 序列 PRRSV SD1 ORF5 基因真核表达载体质粒构建及 | 第56-72页 |
| 1 材料与方法 | 第56-65页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·质粒及工程菌 | 第56页 |
| ·所用引物 | 第56页 |
| ·CpG-ODN序列 | 第56页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第56-57页 |
| ·细胞和抗原 | 第57页 |
| ·实验动物 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-62页 |
| ·PCR 扩增ORF5 基因 | 第57-58页 |
| ·ORF5 基因的纯化 | 第58页 |
| ·pVAX1-ORF5 载体的构建 | 第58页 |
| ·CpG-pVAX1-ORF5 重组质粒的构建 | 第58-60页 |
| ·CpG-pVAX1-ORF5 重组质粒质粒的序列测定 | 第60页 |
| ·重组质粒的纯化和转染细胞 | 第60-61页 |
| ·重组质粒转染细胞 | 第61页 |
| ·间接免疫荧光实验（IFA） | 第61页 |
| ·基因的转录鉴定 | 第61-62页 |
| ·免疫小鼠 | 第62-65页 |
| ·免疫用质粒DNA 的制备 | 第62-63页 |
| ·实验分组 | 第63页 |
| ·脾T 淋巴细胞的制备 | 第63页 |
| ·脾T 淋巴细胞亚群数量的检测 | 第63-64页 |
| ·淋巴细胞转化试验 | 第64-65页 |
| ·免疫小鼠血清抗体检测 | 第65页 |
| 2 结果 | 第65-72页 |
| ·重组质粒的构建 | 第65-66页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第65页 |
| ·pVAX1-ORF5 和CpG-pVAX1-ORF5 重组质粒的鉴定 | 第65-66页 |
| ·CpG-pVAX1-ORF5 测序鉴定 | 第66页 |
| ·质粒CpG-pVAX1-ORF5 的转染与RT-PCR 鉴定基因的转录 | 第66-67页 |
| ·质粒 CpG-pVAX1- ORF5 的体外表达 | 第66-67页 |
| ·T 细胞亚类数量的检测 | 第67-68页 |
| ·小鼠外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞转化试验（MTT 法） | 第68-70页 |
| ·小鼠外周血淋巴细胞的刺激作用的结果分析 | 第68-69页 |
| ·小鼠脾脏细胞的刺激作用的结果分析 | 第69-70页 |
| ·实验小鼠血清中 PRRSV 特异性抗体测定 | 第70-72页 |
| 实验三：含 CpG 序列 PRRSV SD1 ORF5 基因真核表达载体质粒对猪体免疫作用研究 | 第72-90页 |
| 1 材料与方法 | 第72-79页 |
| ·实验动物 | 第72页 |
| ·病毒和抗原 | 第72页 |
| ·质粒和引物 | 第72页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第72-74页 |
| ·试剂 | 第72-73页 |
| ·主要仪器 | 第73页 |
| ·溶液的配制 | 第73-74页 |
| ·实验动物分组及免疫 | 第74页 |
| ·攻毒 | 第74页 |
| ·淋巴细胞转化试验 | 第74-75页 |
| ·淋巴细胞悬液的制备 | 第74页 |
| ·实验猪淋巴细胞增值反应的测定 | 第74-75页 |
| ·数据处理 | 第75页 |
| ·免疫血清特异性抗体和中和抗体的检测 | 第75-76页 |
| ·血清特异性抗体的检测 | 第75页 |
| ·血清的中和抗体的检测 | 第75-76页 |
| ·IL-2 的定量检测 | 第76-77页 |
| ·准备工作 | 第76页 |
| ·试验步骤 | 第76-77页 |
| ·实验猪PRRSV的RT-PCR检测和病理学观察 | 第77-79页 |
| ·临床观察 | 第77页 |
| ·病理组织切片观察 | 第77-79页 |
| 2、结果 | 第79-90页 |
| ·实验猪淋巴细胞增殖反应的测定 | 第79-81页 |
| ·血清的 ELISA 抗体水平和中和抗体水平的检测 | 第81-82页 |
| ·血清的 ELISA 抗体水平 | 第81-82页 |
| ·特异性中和抗体效价的测定 | 第82页 |
| ·重组质粒对猪血清中 IL-2 浓度的影响 | 第82-84页 |
| ·实验猪PRRSV 的RT-PCR 检测和病理学观察 | 第84-90页 |
| ·免疫猪攻毒后4 周的临床症状和病理变化 | 第84-85页 |
| ·组织和血清中 PRRSV 核酸的检测 | 第85-87页 |
| ·病理切片观察 | 第87-90页 |
| 四、讨论 | 第90-98页 |
| ·淋巴细胞转化试验（MTT 法）进行体外筛选不同CpG-ODN序列的讨论 | 第90页 |
| ·不同长度的 CpG-ODN 活性不同的机制探讨 | 第90-91页 |
| ·对 CpG 骨架进行了硫代修饰必要性的讨论 | 第91页 |
| ·关于PRRSV ORF5 基因免疫方面的研究 | 第91-93页 |
| ·在构建DNA疫苗时，载体的选择是一个很关键的问题 | 第93页 |
| ·真核重组表达质粒表达外源基因水平的讨论 | 第93页 |
| ·CpG-ODN 免疫增强活性的讨论 | 第93-95页 |
| ·CpG-ODN 对猪体攻毒保护试验的讨论 | 第95页 |
| ·PRRSV 攻毒试验中对猪体造成病理损伤及致病机制的探讨 | 第95-96页 |
| ·CpG-ODN 的研究意义和发展前景的讨论 | 第96-98页 |
| 五、结论 | 第98-99页 |
| 六、参考文献 | 第99-126页 |
| 七、附录 | 第126-132页 |
| 八、致谢 | 第132-134页 |
| 九、在博士期间发表录用的文章及获奖情况 | 第134页 |
