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STAT3基因转染牛乳腺上皮细胞及转染后细胞的生物学特性观察

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-10页
第一章 细胞永生化的研究进展第10-17页
   ·引言第10页
   ·关于细胞的衰老、危机、永生化第10-11页
     ·衰老第10页
     ·危机第10-11页
     ·永生化第11页
   ·细胞永生化的分子机制第11-13页
     ·P53第11页
     ·PRb第11-13页
   ·促使细胞永生的基本方法第13-15页
     ·病毒转染第13-14页
     ·端粒酶第14-15页
     ·放射性因素第15页
     ·癌基因、原癌基因第15页
   ·永生化细胞的检测方法第15-16页
     ·检测外源基因在细胞中的整合及表达情况第15-16页
     ·端粒酶活性的检测第16页
     ·永生化细胞表面抗原的检测第16页
     ·永生化细胞功能的检测第16页
   ·目前存在的问题及发展前景第16-17页
第二章 癌基因STAT3 的研究近况第17-23页
   ·引言第17页
   ·STAT3 的基本结构及生理功能第17-18页
   ·STAT3 的激活途径第18页
     ·JAK-Stat 途径第18页
     ·Ras-MAPK 途径第18页
     ·非受体型酪氨酸酶激活作用第18页
   ·STAT3 与疾病的关系第18-23页
     ·Stat3 与中枢神经系统疾病第18-19页
     ·Stat3 与肿瘤的形成及侵袭第19-21页
     ·Stat3 与心血管系统疾病第21页
     ·Stat3 与其他疾病第21-22页
     ·Stat3 与疾病治疗第22页
     ·展望第22-23页
第三章 乳腺上皮细胞分离纯化方法的研究进展第23-28页
   ·引言第23页
   ·乳腺上皮细胞的分离第23-25页
     ·组织块培养法第23页
     ·非酶学消化法(螯合或解聚溶液)第23-24页
     ·酶消化分离法第24-25页
   ·乳腺上皮细胞的纯化第25页
     ·密度梯度离心第25页
     ·滤膜分离第25页
     ·流式细胞技术第25页
     ·贴壁选择第25页
   ·成纤维细胞的去除第25-26页
     ·克隆板克隆第25-26页
     ·机械刮除法第26页
     ·克隆环分离法第26页
     ·相差消化法第26页
     ·相差贴壁法第26页
   ·小结第26-28页
第四章 牛乳腺上皮细胞的分离培养及STAT3 表达载体的构建第28-38页
   ·材料与方法第28-34页
     ·材料第28-31页
     ·实验方法第31-34页
   ·实验结果第34-37页
     ·原代培养的牛乳腺上皮细胞形态特征第34-35页
     ·STAT3 基因的扩增及重组质粒的酶切鉴定第35-36页
     ·序列分析结果第36-37页
   ·讨论第37页
   ·小结第37-38页
第五章 重组真核表达载体转染牛乳腺上皮细胞及其生物学特性观察第38-47页
   ·材料与方法第38-42页
     ·材料第38页
     ·试剂配制第38-39页
     ·实验方法第39-42页
   ·实验结果第42-45页
     ·RT- PCR 检测细胞中Stat3 mRNA第42-43页
     ·质粒转染牛乳腺上皮细胞及阳性克隆的获得第43页
     ·转染Stat3 基因后细胞的增殖情况及细胞周期的变化第43-44页
     ·转染Stat3 后细胞染色体倍数变化第44-45页
   ·讨论第45-46页
   ·小结第46-47页
参考文献第47-60页
英文缩略词表第60-61页
致谢第61-62页
个人简介第62页

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