| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第10-18页 |
| ·极端生物 | 第10页 |
| ·嗜热微生物和高温酶 | 第10-11页 |
| ·未培养技术 | 第11-12页 |
| ·未培养微生物资源介绍 | 第11页 |
| ·纯培养技术与未培养技术 | 第11-12页 |
| ·环境宏基因组学 | 第12页 |
| ·碱性蛋白酶介绍 | 第12-13页 |
| ·碱性蛋白酶的背景和现状 | 第12-13页 |
| ·碱性蛋白酶作用机制机理介绍 | 第13页 |
| ·酶的定向进化介绍 | 第13-14页 |
| ·酶的定向进化介绍 | 第13-14页 |
| ·易错滚环复制技术介绍 | 第14页 |
| ·南极、深海生态学研究简介 | 第14-18页 |
| ·南极概况 | 第14-15页 |
| ·深海环境简介 | 第15-16页 |
| ·南极微生物学研究进展 | 第16-18页 |
| 2.材料与方法 | 第18-35页 |
| ·材料 | 第18-24页 |
| ·基本方法 | 第24-27页 |
| ·ZS位点土壤沉积物样品微生物宏基因组Cosmid文库的构建及研究 | 第27-32页 |
| ·ZS cosmid DNA宏基因组文库中蛋白酶酶活筛选 | 第32页 |
| ·Folin-酚法测定蛋白酶活力 | 第32-33页 |
| ·蛋白酶的定向进化-易错滚环扩展法 | 第33-35页 |
| 3.结果与分析 | 第35-49页 |
| ·南极中山站排污口土样微生物宏基因组文库的构建和研究 | 第35-39页 |
| ·土壤样品中大片段DNA提取结果 | 第35页 |
| ·土壤样品中大片段目的DNA的分离筛选 | 第35-36页 |
| ·土壤样品中大片段目的DNA的回收和浓度控制 | 第36-37页 |
| ·土壤样品中大片段目的插入DNA末端补平和浓度控制 | 第37页 |
| ·ZS Cosmid宏基因组文库构建和评估 | 第37-39页 |
| ·ZS Cosmid宏基因组文库的蛋白酶活性基因的筛选 | 第39页 |
| ·蛋白酶基因的克隆和测序 | 第39页 |
| ·蛋白酶基因的序列分析 | 第39-43页 |
| ·蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达及产物纯化 | 第43-44页 |
| ·蛋白酶性质 | 第44-47页 |
| ·温度对酶活力及稳定性的影响 | 第44-45页 |
| ·pH值对酶活力的影响 | 第45页 |
| ·钙离子对酶热稳定性的影响 | 第45-46页 |
| ·金属离子及螯合剂对蛋白酶活力的影响 | 第46-47页 |
| ·表面活性剂对蛋白酶活力的影响 | 第47页 |
| ·蛋白酶的定向进化改造 | 第47-49页 |
| 4.讨论 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
