| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| CONTENTS | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-30页 |
| §1.1 DNA甲基化的概述 | 第12-20页 |
| §1.1.1 DNA甲基化和CpG岛 | 第12-13页 |
| §1.1.2 DNA甲基化与基因关系 | 第13-14页 |
| §1.1.3 DNA甲基化与疾病 | 第14-16页 |
| §1.1.4 DNA甲基化在肿瘤临床诊断中的应用 | 第16-20页 |
| §1.2 DNA甲基化的检测现状 | 第20-25页 |
| §1.2.1 基于甲基化特异结合蛋白或抗体法的方法 | 第20-22页 |
| §1.2.2 甲基化敏感限制性内切酶(MSREs)法 | 第22页 |
| §1.2.3 亚硫酸盐转化的方法 | 第22-25页 |
| §1.3 大肠癌早期诊断 | 第25-27页 |
| §1.3.1 大便潜血试验是最基本的检测方法 | 第26页 |
| §1.3.2 内镜是发现及诊断早期大肠癌的重要技术手段 | 第26页 |
| §1.3.3 生物标志物检测是一条新的途径 | 第26-27页 |
| §1.4 大肠癌相关基因的甲基化 | 第27-29页 |
| §1.5 本论文研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-38页 |
| §2.1 细胞系及标本来源 | 第30页 |
| §2.2 试验方法 | 第30-37页 |
| §2.2.1 DNA模板的制备 | 第30-31页 |
| §2.2.2 引物和探针的设计 | 第31-32页 |
| §2.2.3 多重PCR检测体系的建立 | 第32页 |
| §2.2.4 HANDs-qMSP检测体系的建立 | 第32-36页 |
| §2.2.5 对照方法MethyLight检测体系的建立 | 第36-37页 |
| §2.3 数据处理 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-70页 |
| §3.1 HANDs-qMSP的原理 | 第38-41页 |
| §3.2 98%质控管的制备方法 | 第41页 |
| §3.3 HAND系统的基本原理 | 第41-42页 |
| §3.4 引物和探针的设计 | 第42-44页 |
| §3.4.1 特异性引物的设计 | 第42-43页 |
| §3.4.2 双链置换探针 | 第43-44页 |
| §3.5 普通多重实时荧光PCR体系的建立 | 第44-48页 |
| §3.5.1 普通多重PCR体系的优化 | 第44-46页 |
| §3.5.2 普通多重PCR体系的相对定量结果 | 第46-48页 |
| §3.6 HANDs-qMSP检测体系的建立 | 第48-62页 |
| §3.6.1 标签的筛选 | 第48页 |
| §3.6.2 HAND系统的优点 | 第48-49页 |
| §3.6.3 加尾单重PCR体系的优化 | 第49-51页 |
| §3.6.4 HANDs-qMSP体系的优化 | 第51-55页 |
| §3.6.5 HANDs-qMSP体系的灵敏度 | 第55-56页 |
| §3.6.6 具有校正能力HANDs-qMSP体系的相对定量能力 | 第56-57页 |
| §3.6.7 HANDs-qMSP检测标本的典型结果 | 第57-59页 |
| §3.6.8 64份大肠癌标本及正常对照的检测结果 | 第59-62页 |
| §3.7 MethyLight检测体系 | 第62-66页 |
| §3.7.1 MethyLight体系的优化 | 第62-63页 |
| §3.7.2 MethyLight体系检测标本的典型结果 | 第63-64页 |
| §3.7.3 MethyLight对64份大肠癌标本及正常对照的检测结果 | 第64-66页 |
| §3.8 讨论 | 第66-70页 |
| §3.8.1 98%质控管的作用 | 第66页 |
| §3.8.2 采用HAND系统的优点 | 第66-68页 |
| §3.8.3 双链置换探针更适用于多重实时PCR体系 | 第68页 |
| §3.8.4 关于内控基因D159和ACTB | 第68页 |
| §3.8.5 CpG岛甲基化表型在临床诊断中意义 | 第68-70页 |
| 第四章 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 附录 | 第81-87页 |
| 英文缩写索引 | 第87-89页 |
| 硕士发表交流论文 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
