| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 缩略词表 | 第16-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-31页 |
| 1 果实成熟相关基因克隆与基因工程在果实延熟上的应用 | 第19-24页 |
| ·乙烯相关基因的研究 | 第19-21页 |
| ·ACC 合成酶 | 第20页 |
| ·ACC 氧化酶 | 第20-21页 |
| ·乙烯受体基因 | 第21页 |
| ·果实软化相关基因的研究 | 第21-24页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶 | 第21-22页 |
| ·果胶甲酯酶 | 第22-23页 |
| ·果胶裂解酶 | 第23页 |
| ·β-半乳糖苷酶 | 第23-24页 |
| ·纤维素酶 | 第24页 |
| 2 植物基因克隆方法简介 | 第24-27页 |
| ·PCR 扩增克隆基因 | 第24-25页 |
| ·差异表达基因筛选法 | 第25-27页 |
| 3 植物基因工程在番木瓜果实成熟调控上的应用 | 第27-31页 |
| ·番木瓜果实成熟软化相关基因的克隆 | 第27页 |
| ·番木瓜体胚发生的研究 | 第27-29页 |
| ·外植体类型对体胚发生的影响 | 第27-28页 |
| ·激素配比对番木瓜体胚发生的影响 | 第28页 |
| ·培养基添加物对体胚发生的影响 | 第28-29页 |
| ·培养条件对体胚发生的影响 | 第29页 |
| ·不同转化方法在番木瓜遗传转化上的应用 | 第29-30页 |
| ·番木瓜果实成熟相关基因的遗传转化 | 第30-31页 |
| 第二章 番木瓜果实不同成熟度cDNA-AFLP 分析 | 第31-51页 |
| 1 材料与方法 | 第31-40页 |
| ·植物材料 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器和设备 | 第31-32页 |
| ·RNA 提取 | 第32页 |
| ·RNA 提取方法 | 第32页 |
| ·总 RNA 完整性、含量和纯度检测 | 第32页 |
| ·cDNA 合成 | 第32-34页 |
| ·第一链cDNA 合成 | 第32-33页 |
| ·第一链cDNA 纯化 | 第33页 |
| ·cDNA 的 LD-PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第34页 |
| ·cDNA 浓度测定 | 第34页 |
| ·cDNA-AFLP | 第34-38页 |
| ·接头制备 | 第35-36页 |
| ·酶切 | 第36页 |
| ·连接 | 第36页 |
| ·预扩增 | 第36-37页 |
| ·选择性扩增 | 第37页 |
| ·PCR 产物聚丙烯酰胺电泳 | 第37-38页 |
| ·扩增产物的银染显色 | 第38页 |
| ·cDNA 差异片段的克隆 | 第38-40页 |
| ·cDNA-AFLP 扩增产物的回收 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·PCR 产物与载体的连接 | 第39-40页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第40页 |
| ·菌液 PCR 鉴定阳性克隆 | 第40页 |
| ·差异片段序列分析 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-49页 |
| ·RNA 提取 | 第40-41页 |
| ·cDNA 合成 | 第41-42页 |
| ·预扩增 | 第42页 |
| ·选择性扩增 | 第42-44页 |
| ·差异片段克隆 | 第44-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| ·番木瓜果肉 RNA 提取 | 第49页 |
| ·双链cDNA 合成 | 第49-50页 |
| ·cDNA-AFLP | 第50-51页 |
| 第三章 番木瓜果实成熟差异表达基因及 Actin 基因的克隆与分析 | 第51-75页 |
| 1 材料与方法 | 第51-56页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·DNA 提取 | 第51页 |
| ·RACE 技术克隆 Actin 及差异基因 | 第51-52页 |
| ·基因开放阅读框的扩增 | 第52-53页 |
| ·生物信息学分析 | 第53页 |
| ·基因在不同成熟度果实的表达量分析 | 第53-56页 |
| ·RNA 提取 | 第53页 |
| ·cDNA 第1 链合成 | 第53-54页 |
| ·PCR 引物设计 | 第54页 |
| ·PCR 反应条件优化 | 第54-55页 |
| ·PCR 反应产物的检测 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-70页 |
| ·CpPOD 基因的克隆与序列分析 | 第56-57页 |
| ·CpMYB 基因的克隆与序列分析 | 第57-59页 |
| ·CpGMP 基因的克隆与序列分析 | 第59-61页 |
| ·CpPAA1 基因的克隆与序列分析 | 第61-63页 |
| ·CpSRF3 基因的克隆与序列分析 | 第63-64页 |
| ·CpActin 基因的克隆与序列分析 | 第64-66页 |
| ·基因在不同成熟度果实的表达量分析 | 第66-70页 |
| ·RNA 提取 | 第66页 |
| ·PCR 反应条件的优化 | 第66-67页 |
| ·CpPOD 基因的表达量分析 | 第67-68页 |
| ·CpMYB 基因的表达量分析 | 第68页 |
| ·CpGMP 基因的表达量分析 | 第68-69页 |
| ·CpPAA1 基因的表达量分析 | 第69页 |
| ·CpSRF3 基因的表达量分析 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-75页 |
| ·CpPOD 基因的克隆与分析 | 第70页 |
| ·CpMYB 基因的克隆与分析 | 第70-71页 |
| ·CpGMP 基因的克隆与分析 | 第71页 |
| ·CpPAA1 基因的克隆与分析 | 第71-72页 |
| ·CpSRF3 基因的克隆与分析 | 第72-73页 |
| ·CpActin 基因的克隆与分析 | 第73页 |
| ·基因在不同成熟度果实的半定量分析 | 第73-75页 |
| 第四章 番木瓜果胶裂解酶基因克隆及反义植物表达载体的构建 | 第75-81页 |
| 1 材料与方法 | 第75-77页 |
| ·植物材料 | 第75页 |
| ·菌株与试剂 | 第75页 |
| ·DNA 与 RNA 提取 | 第75页 |
| ·PL 基因3'端的克隆 | 第75-76页 |
| ·PL 基因5'端的克隆 | 第76页 |
| ·PL 基因 DNA 序列克隆与分析 | 第76页 |
| ·生物信息学分析 | 第76页 |
| ·PL 基因的表达量分析 | 第76页 |
| ·PL 基因反义植物表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-80页 |
| ·PL 基因3'端的获得 | 第77页 |
| ·PL 基因5'端的获得 | 第77页 |
| ·PL 基因 DNA 序列克隆 | 第77-79页 |
| ·PL 基因表达量分析 | 第79页 |
| ·PL 基因反义植物表达载体的构建 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-81页 |
| 第五章 番木瓜 PL 和β-Gal 基因双价植物反义表达载体的构建 | 第81-87页 |
| 1 材料与方法 | 第81-82页 |
| ·材料 | 第81页 |
| ·菌株和质粒 | 第81页 |
| ·酶与化学试剂 | 第81页 |
| ·直接连接法 | 第81-82页 |
| ·分步连接法 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-85页 |
| ·直接连接法 | 第82-84页 |
| ·分步连接法 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 番木瓜体胚发生系统的建立及遗传转化 | 第87-95页 |
| 1 材料与方法 | 第87-89页 |
| ·植物材料 | 第87页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·体胚发生系统的建立 | 第87-89页 |
| ·建立无菌系 | 第87页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第87-88页 |
| ·体胚诱导 | 第88页 |
| ·体胚萌发 | 第88-89页 |
| ·遗传转化 | 第89页 |
| ·工程菌液制备 | 第89页 |
| ·转化 | 第89页 |
| ·选择性培养 | 第89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-93页 |
| ·不同激素组合对幼胚愈伤组织诱导的影响 | 第89-90页 |
| ·不同激素组合对体胚诱导的影响 | 第90-92页 |
| ·体胚萌发 | 第92页 |
| ·遗传转化结果 | 第92-93页 |
| 3 讨论 | 第93-95页 |
| 小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-110页 |
| 附录1 四个不同成熟度番木瓜果实彩照 | 第110-111页 |
| 附录2 番木瓜 POD 基因核苷酸及氨基酸序列 | 第111-112页 |
| 附录3 九种高等植物 POD 氨基酸序列同源性比对分析 | 第112-113页 |
| 附录4 CpPOD 与拟南芥 POD 的分子进化分析 | 第113-114页 |
| 附录5 番木瓜 MYB 基因核苷酸及氨基酸序列 | 第114-115页 |
| 附录6 九种高等植物 MYB 氨基酸序列同源性比对分析 | 第115-116页 |
| 附录7 MYB 分子进化树 | 第116-117页 |
| 附录8 番木瓜 GMP 基因核苷酸及氨基酸序列 | 第117-119页 |
| 附录9 十种高等植物 GMP 氨基酸序列同源性比对分析 | 第119-120页 |
| 附录10 GMP 分子进化树 | 第120-121页 |
| 附录11 番木瓜 PAA1 基因核苷酸及氨基酸序列 | 第121-122页 |
| 附录12 九种高等植物 PAA1 氨基酸序列同源性比对分析 | 第122-123页 |
| 附录13 PAA1 分子进化树 | 第123-124页 |
| 附录14 番木瓜 SRF3 基因核苷酸及氨基酸序列 | 第124-125页 |
| 附录15 番木瓜 Actin 基因核苷酸及氨基酸序列 | 第125-126页 |
| 附录16 九种高等植物 Actin 氨基酸序列同源性比对分析 | 第126-127页 |
| 附录17 Actin 分子进化树 | 第127-128页 |
| 附录18 番木瓜 PL 基因核苷酸及氨基酸序列 | 第128-130页 |
| 附录19 十种高等植物 PL 氨基酸序列同源性比对分析 | 第130-131页 |
| 附录20 PL 分子进化树 | 第131-132页 |
| 附录21 番木瓜果实成熟差异表达基因片段 DNA 序列 | 第132-138页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
