| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 缩写词 | 第18-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-43页 |
| 1 柑橘果实成熟过程的相关生理研究 | 第21-27页 |
| ·碳水化合物方面的研究 | 第21-25页 |
| ·糖类代谢 | 第22-23页 |
| ·淀粉代谢 | 第23页 |
| ·果胶代谢 | 第23-24页 |
| ·糖诱导的酶活性调节 | 第24-25页 |
| ·有机酸的变化 | 第25-26页 |
| ·膨压和渗透压调节 | 第26-27页 |
| 2 柑橘果实粒化的研究进展 | 第27-33页 |
| ·果实的大小和重量、果形 | 第28页 |
| ·种子的饱满度和生存力 | 第28-29页 |
| ·汁胞 | 第29-30页 |
| ·可溶性固形物 | 第30页 |
| ·可滴定酸和汁液的pH 值 | 第30页 |
| ·生长调节剂 | 第30-31页 |
| ·酶和酶的活性 | 第31-32页 |
| ·无机物组成 | 第32页 |
| ·其它物质 | 第32-33页 |
| 3 差异蛋白质组学研究 | 第33-39页 |
| ·二维凝胶电泳 | 第34页 |
| ·差异凝胶电泳 | 第34页 |
| ·质谱技术 | 第34-36页 |
| ·同位素标记亲和标签 | 第36页 |
| ·蛋白质芯片 | 第36页 |
| ·蛋白质的翻译后修饰 | 第36-37页 |
| ·研究蛋白质组学的生物信息学 | 第37-38页 |
| ·蛋白质组学在植物上的应用 | 第38-39页 |
| 4 植物抗坏血酸过氧化物酶的作用机制、酶学及分子特性 | 第39-41页 |
| ·H_2O_2 的产生和清除及APX 的作用机制 | 第39-40页 |
| ·植物APX 的分子和酶学特征 | 第40页 |
| ·植物APX 的系统分布及同工酶间的异同 | 第40-41页 |
| 本论文研究的目的意义和主要内容 | 第41-43页 |
| 1 本论文研究的目的意义 | 第41-42页 |
| 2 本论文研究的主要内容 | 第42-43页 |
| 第二章 琯溪蜜柚汁胞双向电泳体系优化 | 第43-55页 |
| 1 材料与方法 | 第44-49页 |
| ·仪器与试剂 | 第44页 |
| ·蛋白质样品的提取优化 | 第44-45页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第45页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞蛋白质组的双向电泳 | 第45-49页 |
| ·IPG 的水化和电泳 | 第45-46页 |
| ·平衡 | 第46-47页 |
| ·SDS 垂直电泳 | 第47-48页 |
| ·染色 | 第48-49页 |
| ·凝胶图像分析 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-52页 |
| ·不同提取方法的比较 | 第49页 |
| ·蛋白质裂解液对2-DE 的影响 | 第49-50页 |
| ·不同长度IPG 干胶条的比较 | 第50-52页 |
| 3 讨论和小结 | 第52-55页 |
| ·影响蛋白质分离因素 | 第52-53页 |
| ·IEF 一些影响因素 | 第53-55页 |
| 第三章 琯溪蜜柚汁胞发育过程中的差异蛋白质组学研究 | 第55-72页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·双向电泳及银染 | 第55页 |
| ·差异表达蛋白点质谱鉴定 | 第55-57页 |
| ·质谱样品制备 | 第56页 |
| ·质谱分析与数据库检索 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-65页 |
| ·不同发育时期的琯溪蜜柚汁胞蛋白质2-DE 分析 | 第57-61页 |
| ·MALDI-TOF-TOF MS 分析及数据库检索 | 第61-65页 |
| 3 讨论 | 第65-72页 |
| ·质谱鉴定技术的应用 | 第65页 |
| ·EST 数据库的应用 | 第65-66页 |
| ·影响鉴定结果的关键因素 | 第66-67页 |
| ·差异蛋白的功能 | 第67-72页 |
| ·糖类和能量代谢相关蛋白质 | 第68-69页 |
| ·蛋白质合成与代谢相关蛋白质 | 第69页 |
| ·细胞结构相关蛋白质 | 第69-70页 |
| ·信号传导与转录因子相关蛋白质 | 第70页 |
| ·抗性相关蛋白质 | 第70-71页 |
| ·调控相关蛋白质 | 第71-72页 |
| 第四章 琯溪蜜柚汁胞粒化过程中的差异蛋白质组学研究 | 第72-79页 |
| 1 材料与方法 | 第72页 |
| ·材料 | 第72页 |
| ·双向电泳、差异蛋白点质谱分析与鉴定 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-77页 |
| ·不同粒化程度的琯溪蜜柚汁胞蛋白质2-DE 分析 | 第72-74页 |
| ·9.28 正常汁胞与9.28 粒化汁胞的分析 | 第72-73页 |
| ·10.18 正常汁胞与10.18 粒化汁胞的分析 | 第73-74页 |
| ·MALDI-TOF-TOF MS 分析及数据库检索 | 第74-76页 |
| ·差异表达的蛋白质的功能分析 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 汁胞差异蛋白质点G6 的cDNA 克隆 | 第79-90页 |
| 1. 材料与方法 | 第80-84页 |
| ·仪器与试剂 | 第80页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞RNA 提取及总RNA 含量和浓度测定 | 第80-81页 |
| ·差异蛋白质点G6 cDNA 扩增 | 第81-84页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第81页 |
| ·引物设计 | 第81-82页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第82页 |
| ·3' RACE PCR 扩增 | 第82页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第82-83页 |
| ·目的片段与T 载体连接、转化及鉴定 | 第83页 |
| ·质粒的提取 | 第83-84页 |
| 2. 结果与分析 | 第84-88页 |
| ·RNA 的质量 | 第84-85页 |
| ·保守区扩增结果 | 第85页 |
| ·3' RACE 结果 | 第85-86页 |
| ·G6 的同源性分析 | 第86-88页 |
| 3. 讨论 | 第88-90页 |
| ·Germin 的发现 | 第88页 |
| ·OXO 的研究状况 | 第88-89页 |
| ·Germin 蛋白的功能 | 第89页 |
| ·Germin 蛋白在琯溪蜜柚汁胞发育与粒化过程中的作用 | 第89-90页 |
| 第六章 琯溪蜜柚汁胞APX 活性测定与同工酶分析 | 第90-97页 |
| 1 材料与方法 | 第90-92页 |
| ·仪器与试剂 | 第90-91页 |
| ·方法 | 第91-92页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞APX 酶液的测定 | 第91页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞APX 同工酶电泳 | 第91-92页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞APX 同工酶的染色 | 第92页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞APX 同工酶迁移率的计算 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-95页 |
| ·不同生长时期琯溪蜜柚汁胞的APX 活性变化 | 第92-93页 |
| ·正常汁胞与粒化汁胞的APX 活性变化 | 第93页 |
| ·不同生长时期琯溪蜜柚汁胞的APX 同工酶变化 | 第93-94页 |
| ·正常汁胞与粒化汁胞的APX 同工酶变化 | 第94-95页 |
| 3 小结和讨论 | 第95-97页 |
| 第七章 琯溪蜜柚汁胞APX1 cDNA 的克隆及原核表达 | 第97-118页 |
| 1. 材料与方法 | 第97-106页 |
| ·材料 | 第97页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞RNA 提取及总RNA 含量和浓度测定 | 第97-98页 |
| ·APX1 cDNA 保守区的扩增 | 第98-99页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第98页 |
| ·引物设计 | 第98页 |
| ·RT-PCR | 第98-99页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第99页 |
| ·目的片段与T 载体连接、转化及鉴定 | 第99页 |
| ·质粒的提取 | 第99页 |
| ·3'RACE | 第99-100页 |
| ·3'RACE PCR 扩增 | 第99-100页 |
| ·3'RACE PCR 产物的回收、纯化 | 第100页 |
| ·3'RACE 目的片度与T 载体连接、转化和鉴定 | 第100页 |
| ·5'RACE | 第100-102页 |
| ·RNA 的逆转录(cDNA 第一链的合成) | 第100页 |
| ·柱纯化cDNA 第一链合成产物 | 第100-101页 |
| ·cDNA 第一链3’端加尾(TaKaRa TdT 试剂) | 第101页 |
| ·柱纯化cDNA 第一链3’端加尾产物 | 第101页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第101页 |
| ·PCR 扩增 | 第101-102页 |
| ·PCR 产物的回收、纯化、连接、转化和鉴定 | 第102页 |
| ·目的片度与T 载体连接、转化和鉴定 | 第102页 |
| ·含酶切位点ORF 的扩增 | 第102-103页 |
| ·APX1 cDNA 的原核表达 | 第103-106页 |
| ·载体酶切 | 第104-105页 |
| ·PCR 回收产物酶切 | 第105页 |
| ·连接 | 第105页 |
| ·转化 | 第105页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第105页 |
| ·测序 | 第105页 |
| ·p32-APX1 克隆至大肠杆菌表达宿主 | 第105-106页 |
| ·重组质粒诱导表达产物的APX 活性测定 | 第106页 |
| 2. 结果与分析 | 第106-116页 |
| ·RNA 的质量 | 第106-107页 |
| ·APX1 cDNA 全长的扩增结果 | 第107-110页 |
| ·保守区扩增结果 | 第107-108页 |
| ·3' RACE 结果 | 第108-109页 |
| ·5' RACE 结果 | 第109-110页 |
| ·APX1 cDNA 全长及其序列分析 | 第110-113页 |
| ·全长序列拼接 | 第110-111页 |
| ·APX1 ORF 推导的氨基酸与其它APX 氨基酸序列比对 | 第111-112页 |
| ·APX1 cDNA 编码的氨基酸的性质及组成 | 第112-113页 |
| ·编码蛋白质产物的疏水性分析 | 第113页 |
| ·APX1 cDNA 的原核表达 | 第113-116页 |
| ·APX1 cDNA ORF 的扩增 | 第113-114页 |
| ·APX1 cDNA 插入载体pET-32a | 第114-115页 |
| ·p32-APX1 在Trans Rosetta(DE3)中的表达 | 第115-116页 |
| ·重组质粒p32-APX1 原核表达产物活性测定 | 第116页 |
| 3 讨论 | 第116-118页 |
| 第八章 琯溪蜜柚汁胞APX2 cDNA 的克隆及原核表达 | 第118-135页 |
| 1. 材料与方法 | 第118-124页 |
| ·材料 | 第118页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞中APX2 cDNA 保守区的克隆 | 第118-119页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第118页 |
| ·引物设计 | 第118页 |
| ·RT-PCR | 第118-119页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第119页 |
| ·目的片段与T 载体连接、转化及鉴定 | 第119页 |
| ·3'RACE 和5'RACE 及全长的拼接 | 第119-121页 |
| ·3'RACE | 第119-120页 |
| ·5'RACE | 第120-121页 |
| ·APX2 cDNA 的原核表达 | 第121-124页 |
| ·含酶切位点ORF 的扩增 | 第122-123页 |
| ·载体酶切 | 第123页 |
| ·PCR 回收产物酶切 | 第123页 |
| ·连接 | 第123页 |
| ·转化 | 第123-124页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第124页 |
| ·测序 | 第124页 |
| ·p28-APX2 克隆至大肠杆菌表达宿主E.c oli BL21(DE3) 感受态细胞的制备 | 第124页 |
| 2. 结果与分析 | 第124-133页 |
| ·保守区扩增结果 | 第124-125页 |
| ·3' RACE 结果 | 第125-126页 |
| ·5' RACE 结果 | 第126-127页 |
| ·APX2 cDNA 全长及其序列分析 | 第127-130页 |
| ·APX2 ORF 推导的氨基酸与其它APX 氨基酸序列比对 | 第128-129页 |
| ·APX2 cDNA 编码的氨基酸的性质及组成 | 第129-130页 |
| ·疏水性分析 | 第130页 |
| ·APX 2 cDNA 的原核表达 | 第130-133页 |
| ·APX 2 cDNA ORF 的扩增 | 第130-131页 |
| ·APX 2 cDNA 插入载体pET-28a | 第131-132页 |
| ·p28-APX2 在E. coli BL21(DE3)中的表达 | 第132-133页 |
| ·重组质粒PET28a-APX2 原核表达产物活性测定 | 第133页 |
| 3. 小结和讨论 | 第133-135页 |
| 第九章 琯溪蜜柚汁胞差异蛋白质点ACTIN 与HSP cDNA 的克隆 | 第135-147页 |
| 1. 方法 | 第137-139页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞中ACTIN cDNA ORF 的克隆 | 第137-138页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第137页 |
| ·引物设计 | 第137页 |
| ·PCR 扩增 | 第137页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第137页 |
| ·目的片段与T 载体连接、转化及鉴定 | 第137-138页 |
| ·琯溪蜜柚汁胞中HSP cDNA 的克隆 | 第138-139页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第138页 |
| ·引物设计 | 第138页 |
| ·PCR 扩增 | 第138页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第138页 |
| ·目的片段与T 载体连接、转化及鉴定 | 第138-139页 |
| 2. 结果与分析 | 第139-144页 |
| ·ACTIN cDNA ORF 的克隆与分析 | 第139-143页 |
| ·ACTIN ORF 扩增结果 | 第139-140页 |
| ·ACTIN ORF 推导的氨基酸与其它ACTIN 氨基酸序列比对 | 第140-141页 |
| ·ACTIN cDNA 编码的氨基酸的性质及组成 | 第141-142页 |
| ·编码蛋白质产物的疏水性分析 | 第142-143页 |
| ·HSP cDNA 的克隆与分析 | 第143-144页 |
| 3 讨论 | 第144-147页 |
| ·ACTIN 在细胞中的作用 | 第144-145页 |
| ·HSP 在细胞中的作用 | 第145-147页 |
| 总结与展望 | 第147-152页 |
| 1. 总结 | 第147-150页 |
| 2. 展望 | 第150-152页 |
| 参考文献 | 第152-162页 |
| 在学期间发表的相关论文 | 第162-164页 |
| 致谢 | 第164页 |
