| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-31页 |
| 1 双孢蘑菇的遗传和变异 | 第17-19页 |
| 2 食用菌基因工程育种研究进展与发展趋势 | 第19-23页 |
| ·用于食用菌基因工程育种辅助的分子标记 | 第20页 |
| ·用于食用菌转化子筛选的选择标记 | 第20-21页 |
| ·食用菌基因工程育种转化方法 | 第21-22页 |
| ·食用菌基因工程育种发展趋势 | 第22-23页 |
| 3 食用菌菌种退化现象及其研究进展 | 第23-24页 |
| 4 食用菌基质降解相关酶类及其研究进展 | 第24-26页 |
| 5 本研究相关技术及在食用菌研究中的应用 | 第26-28页 |
| ·序列相关扩增多态性(SRAP) | 第26页 |
| ·同工酶电泳 | 第26-27页 |
| ·mRNA 差异显示(DDRT-PCR) | 第27-28页 |
| ·蛋白质双向电泳(2D-PAGE) | 第28页 |
| 6 本研究的背景、意义及主要内容 | 第28-31页 |
| ·本研究的背景及意义 | 第28-30页 |
| ·本研究的主要内容 | 第30-31页 |
| 第二章 双孢蘑菇基质降解能力退化菌株的保藏、培养与性状验证 | 第31-35页 |
| 1 材料与方法 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-32页 |
| ·菌株的保藏 | 第31-32页 |
| ·菌丝的培养 | 第32页 |
| ·混合接种试验 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-34页 |
| ·退化性状验证 | 第32页 |
| ·退化原因验证 | 第32-33页 |
| ·液体培养试验 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 双孢蘑菇基质降解能力退化的SRAP 分析 | 第35-41页 |
| 1 材料与方法 | 第35-38页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·供试菌株 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·引物 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-38页 |
| ·菌丝的培养 | 第37页 |
| ·总DNA 的提取 | 第37页 |
| ·SRAP 分析 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 双孢蘑菇基质降解能力退化的同工酶分析 | 第41-45页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·供试菌株 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·菌丝的培养 | 第42页 |
| ·电泳样品的制备 | 第42页 |
| ·电泳方法 | 第42页 |
| ·染色方法 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 双孢蘑菇基质降解能力退化的 DDRT-PCR 分析 | 第45-63页 |
| 1 材料与方法 | 第45-54页 |
| ·材料 | 第45-48页 |
| ·菌株 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45-46页 |
| ·引物 | 第46-48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-54页 |
| ·菌丝的培养 | 第48页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第48-49页 |
| ·总RNA的变性凝胶电泳 | 第49页 |
| ·m RNA 逆转录 | 第49-50页 |
| ·DDRT-PCR 分析 | 第50页 |
| ·差异片段的重新扩增 | 第50页 |
| ·全长cDNA 文库的构建与鉴定 | 第50-51页 |
| ·特异基因与片段的扩增 | 第51页 |
| ·目的差异DNA片段的纯化、克隆与鉴定 | 第51-54页 |
| ·克隆子测序与分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-61页 |
| ·双孢蘑菇 As2796 及其退化菌株的总 RNA 提取及检测 | 第54-55页 |
| ·双孢蘑菇As2796 及其退化菌株的DDRT-PCR 分析 | 第55页 |
| ·差异条带的克隆、测序与同源性检索 | 第55-58页 |
| ·双孢蘑菇全长cDNA 文库的构建及差异基因CDS 的扩增 | 第58-59页 |
| ·差异基因及上游序列的克隆、测序及比较 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 双孢蘑菇基质降解能力退化的2D-PAGE 分析 | 第63-76页 |
| 1 材料与方法 | 第63-70页 |
| ·材料 | 第63-65页 |
| ·菌株 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63-65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-70页 |
| ·菌丝的培养 | 第65页 |
| ·蛋白质的提取 | 第65-66页 |
| ·蛋白质的定量 | 第66-67页 |
| ·蛋白质双向电泳 | 第67-69页 |
| ·凝胶染色(胶体考马斯蓝G-250) | 第69页 |
| ·凝胶扫描与分析 | 第69-70页 |
| ·质谱分析与数据库检索 | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-75页 |
| ·双孢蘑菇总蛋白质的提取 | 第70页 |
| ·双孢蘑菇蛋白质2D-PAGE 技术的建立 | 第70-71页 |
| ·双孢蘑菇 As2796 及其退化菌株的2D-PAGE 分析 | 第71-73页 |
| ·差异蛋白质点的质谱分析与鉴定 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 第七章 结论与展望 | 第76-79页 |
| 1 研究总结 | 第76-77页 |
| 2 特色与创新点 | 第77页 |
| 3 下一步研究计划 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 附录1 DDRT-PCR 差异基因的CDS 及预测的蛋白质序列 | 第87-92页 |
| 附录2 DDRT-PCR 差异基因及上游序列在三个菌株中的比较 | 第92-104页 |
| 附录3 博士期间发表的论文与承担的课题 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
