反向重复结构不同位置侧翼序列诱导的基因沉默差异比较
| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 一 引言 | 第14-34页 |
| 1 RNA 沉默 | 第14-25页 |
| ·RNA 沉默的发现 | 第14-15页 |
| ·RNA 沉默的分子机制 | 第15-17页 |
| ·参与RNA 沉默相关的酶及其组成 | 第17-20页 |
| ·基因沉默的起始和维持 | 第20-23页 |
| ·RNA 沉默的应用前景 | 第23-25页 |
| 2 绿色荧光蛋白研究进展 | 第25-27页 |
| ·绿色荧光蛋白的性质 | 第25-26页 |
| ·GFP 的应用 | 第26-27页 |
| 3 农杆菌介导的瞬时表达体系 | 第27-28页 |
| 4 荧光定量PCR 研究进展 | 第28-30页 |
| ·荧光定量PCR 原理 | 第28-29页 |
| ·荧光定量PCR 的特点 | 第29页 |
| ·荧光定量PCR 技术的应用 | 第29-30页 |
| 5 本研究的立题依据和主要研究内容 | 第30-34页 |
| ·立题依据 | 第30-31页 |
| ·目的意义 | 第31-34页 |
| 二 材料与方法 | 第34-52页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·菌株和载体 | 第34-35页 |
| ·常用缓冲液及培养基的配制 | 第35页 |
| ·常用化学试剂分子生物学试剂 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-52页 |
| ·GFP 目的基因片段的获得 | 第35-37页 |
| ·克隆载体构建 | 第37-40页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第40-44页 |
| ·重组质粒的农杆菌转化 | 第44-45页 |
| ·农杆菌侵染植株 | 第45-46页 |
| ·植株表型的观察 | 第46页 |
| ·GFP 基因RNA 水平分析 | 第46-49页 |
| ·GFP 蛋白质水平分析 | 第49-52页 |
| 三 结果与分析 | 第52-76页 |
| 1 目的片段的获得 | 第52-54页 |
| ·目的片段的扩增 | 第52-54页 |
| ·切胶回收目的片段 | 第54页 |
| 2 重组克隆载体的鉴定 | 第54-58页 |
| ·重组中间载体的电泳 | 第54-55页 |
| ·重组中间载体的PCR 鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组中间载体的酶切鉴定 | 第56-58页 |
| ·DNA 序列测定 | 第58页 |
| 3 植物表达载体的构建 | 第58-64页 |
| ·目的片段的酶切 | 第58-59页 |
| ·植物表达载体pRIR202 的酶切 | 第59页 |
| ·目的片段与植物表达载体的连接转化 | 第59页 |
| ·重组植物表达载体的鉴定 | 第59-64页 |
| 4 植株表型分析结果 | 第64-68页 |
| ·野生型和16C 在紫外灯照射下的表型 | 第64-65页 |
| ·农杆菌共浸润叶片GFP 基因沉默的表型 | 第65-66页 |
| ·农杆菌共浸润整个植株GFP 基因沉默的表型 | 第66-68页 |
| 5 GFP 基因的荧光定量PCR 分析结果 | 第68-74页 |
| ·植物总RNA 的提取结果 | 第68-69页 |
| ·荧光定量PCR 产物电泳检测 | 第69-70页 |
| ·荧光定量PCR | 第70-74页 |
| 6 GFP 的Western 分析结果 | 第74-76页 |
| 四 讨论 | 第76-80页 |
| 1 植物表达载体的构建 | 第76页 |
| 2 根癌农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第76-77页 |
| 3 农杆菌介导的基因沉默体系的建立及优化 | 第77-78页 |
| 4 荧光定量方法的建立与分析 | 第78-79页 |
| 5 RNA 沉默的分析 | 第79-80页 |
| 五 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 附录 | 第90-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 在学期间发表论文和获奖情况 | 第96页 |
