耐热β-半乳糖苷酶的克隆与表达研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 1 绪论 | 第7-12页 |
| ·Β-半乳糖苷酶简介 | 第7-10页 |
| ·β-半乳糖苷酶 | 第7页 |
| ·β-半乳糖苷酶的来源 | 第7-8页 |
| ·β-半乳糖苷酶的应用 | 第8-10页 |
| ·高温Β-半乳糖苷酶的研究 | 第10页 |
| ·高温酶的应用 | 第10页 |
| ·嗜热脂肪芽孢杆菌β-半乳糖苷酶的基因 | 第10页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统及毕赤酵母表达系统 | 第10-11页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第10页 |
| ·真核表达系统研究进展 | 第10页 |
| ·已经进行的研究 | 第10-11页 |
| ·本文的立题背景主要研究内容 | 第11-12页 |
| ·课题的立题背景与意义 | 第11页 |
| ·主要研究内容 | 第11-12页 |
| 2 材料与方法 | 第12-18页 |
| ·实验材料 | 第12-14页 |
| ·菌株和质粒 | 第12页 |
| ·PCR 引物 | 第12-13页 |
| ·药品试剂 | 第13页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13-14页 |
| ·实验方法 | 第14-18页 |
| ·常规操作技术 | 第14页 |
| ·β-半乳糖苷酶酶活检测 | 第14页 |
| ·感受态细胞的制备与电转化方法 | 第14-15页 |
| ·多拷贝转化子的筛选与重组转化子的验证 | 第15-16页 |
| ·重组菌株的发酵表达 | 第16-18页 |
| 3 结果与讨论 | 第18-30页 |
| ·BGAB 基因在枯草芽孢杆菌中的克隆与表达 | 第18-22页 |
| ·bgaB 基因的克隆 | 第18页 |
| ·含四种不同信号肽的表达载体的构建 | 第18-20页 |
| ·重组质粒电转化至枯草芽孢杆菌 | 第20页 |
| ·重组质粒在枯草杆菌W8600 中的表达 | 第20-21页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第21页 |
| ·bgaB 基因在枯草芽孢杆菌中的表达结果小结 | 第21-22页 |
| ·BGAB 基因在毕赤酵母中的克隆与表达 | 第22-26页 |
| ·bgaB 基因的扩增 | 第22页 |
| ·pPIC9k-bgaB 重组表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·重组质粒电转化至毕赤酵母G5115 | 第23页 |
| ·重组阳性转化子的筛选 | 第23-24页 |
| ·重组转化子的验证 | 第24页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第25页 |
| ·bgaB 在毕赤酵母中的表达小结 | 第25-26页 |
| ·BGAB 基因在乳酸克鲁维酵母中的克隆与表达 | 第26-29页 |
| ·bgaB 基因的扩增 | 第26页 |
| ·pKLAC1-bgaB 重组表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·重组质粒电转化至乳酸克鲁维酵母GG799 | 第27页 |
| ·整合转化子和多拷贝的验证 | 第27-28页 |
| ·重组菌的分泌表达 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第28-29页 |
| ·乳酸克鲁维酵母的表达小结 | 第29页 |
| ·展望 | 第29-30页 |
| 4 主要结论 | 第30-31页 |
| 致谢 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-37页 |
| 附录 硕士期间发表的论文 | 第37-38页 |
| 附表 | 第38页 |
