| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-12页 |
| ·β 干扰素的基因与结构 | 第7-8页 |
| ·β 干扰素的临床应用 | 第8-10页 |
| ·多发性硬化症 | 第8页 |
| ·人结肠癌和肺腺癌 | 第8页 |
| ·基底细胞癌 | 第8页 |
| ·抗寄生虫 | 第8页 |
| ·慢性乙、丙型肝炎 | 第8-9页 |
| ·SARS | 第9页 |
| ·带状疱疹 | 第9页 |
| ·不良反应与预防 | 第9-10页 |
| ·β 干扰素应用上的局限性及改进 | 第10-11页 |
| ·立题背景及研究内容 | 第11-12页 |
| 第二章 毕赤酵母融合蛋白 IFNβ-HSA 高产菌株的筛选 | 第12-25页 |
| ·材料 | 第12-14页 |
| ·仪器和设备 | 第12页 |
| ·主要试剂 | 第12-13页 |
| ·培养基 | 第13-14页 |
| ·质粒及菌株 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-19页 |
| ·G418 抗性筛选高拷贝重组子 | 第14-18页 |
| ·免疫学方法筛选高表达重组子 | 第18-19页 |
| ·结果与讨论 | 第19-24页 |
| ·重组质粒pPIC9K-IFNβ-HSA 的富集 | 第19-20页 |
| ·SalⅠ酶切重组质粒pPIC9K-IFNβ-HSA | 第20页 |
| ·线性化重组质粒pPIC9K-IFNβ-HSA 片段的纯化 | 第20页 |
| ·G418 抗性筛选出的菌株在摇瓶的表达情况 | 第20-21页 |
| ·应用免疫学方法筛选高表达转化子 | 第21-23页 |
| ·高表达菌株的获得 | 第23-24页 |
| ·Western Blot 鉴定融合蛋白 | 第24页 |
| ·小节 | 第24-25页 |
| 第三章 融合蛋白 IFNβ-HSA 发酵工艺的建立 | 第25-37页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·菌种 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·毕赤酵母摇瓶培养的生长和诱导情况 | 第26-27页 |
| ·摇瓶培养过程中甘油含量的测定 | 第27页 |
| ·毕赤酵母摇瓶表达IFNβ-HSA 单因素优化 | 第27-28页 |
| ·有机培养基上罐条件的建立 | 第28页 |
| ·双抗夹心法ELISA 测定融合蛋白IFNβ-HSA 表达量 | 第28-29页 |
| ·合成培养基上罐条件的探索 | 第29-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-36页 |
| ·毕赤酵母的生长曲线 | 第30页 |
| ·时间对毕赤酵母表达IFNβ-HSA 的影响 | 第30页 |
| ·诱导表达IFNβ-HSA 条件的单因素分析 | 第30-31页 |
| ·菌体生长对甲醇的耐受性 | 第31页 |
| ·高效液相色谱法测定摇瓶发酵液中的甘油 | 第31-32页 |
| ·罐上有机培养基发酵毕赤酵母的生长及表达情况 | 第32-33页 |
| ·罐上合成培养基发酵毕赤酵母的生长及表达情况 | 第33-36页 |
| ·小节 | 第36-37页 |
| 第四章 融合蛋白 IFNβ-HSA 纯化工艺的建立 | 第37-48页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·仪器和设备 | 第37页 |
| ·层析填料 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·初步纯化条件的摸索 | 第38-39页 |
| ·改进的蛋白纯化路线 | 第39页 |
| ·HPLC 检测融合蛋白纯度 | 第39页 |
| ·细胞病变抑制法测定融合蛋白活性 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-47页 |
| ·乙醇沉淀IFNβ-HSA 的效果 | 第40页 |
| ·超滤浓缩脱盐 | 第40页 |
| ·利用超滤分级去除色素 | 第40-41页 |
| ·阳离子交换层析结果 | 第41页 |
| ·镍离子螯合亲和层析结果 | 第41-42页 |
| ·阴离子交换层析结果 | 第42页 |
| ·凝胶过滤层析结果 | 第42-43页 |
| ·改进纯化路线后的分离纯化效果 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的Western Blotting 鉴定 | 第44-45页 |
| ·HPLC 检测融合蛋白纯度 | 第45页 |
| ·融合蛋白的生物活性 | 第45-47页 |
| ·小节 | 第47-48页 |
| 第五章 论文总结 | 第48-49页 |
| ·主要结论 | 第48页 |
| ·存在的问题与展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 已发表的文章 | 第54页 |
