| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1 伪狂犬病病毒研究进展 | 第10-16页 |
| ·猪伪狂犬病流行特点 | 第10页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第10-11页 |
| ·发病机理 | 第11页 |
| ·病毒分子生物学 | 第11-14页 |
| ·PRV的诊断 | 第14-16页 |
| 2 核酸疫苗研究进展 | 第16-20页 |
| ·核酸疫苗发现 | 第16-17页 |
| ·核酸疫苗免疫应答 | 第17页 |
| ·核酸疫苗的构建 | 第17-18页 |
| ·减毒沙门菌载体及其在疫苗研究中的应用进展 | 第18-20页 |
| 3 PRV gL基因的结构和功能 | 第20-22页 |
| ·PRV gL基因的机构 | 第20页 |
| ·PRV gL基因的功能 | 第20-21页 |
| ·PRV gL基因研究的重要性 | 第21-22页 |
| 第二章 PRV gL基因的分子克隆与序列分析 | 第22-32页 |
| 1 材料与方法 | 第22-28页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·毒株、细胞、菌株及试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·主要溶液配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·PRV的增殖 | 第23-24页 |
| ·PRV病毒DNA的提取 | 第24页 |
| ·特异性引物设计 | 第24页 |
| ·聚合酶链反应(PCR)扩增gL基因 | 第24-25页 |
| ·扩增产物电泳鉴定 | 第25页 |
| ·目的片段克隆载体构建 | 第25-26页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第26-27页 |
| ·转化菌落的鉴定 | 第27-28页 |
| ·核苷酸序列的测定及分析 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-31页 |
| ·PCR扩增目的基因电泳鉴定 | 第28页 |
| ·重组克隆质粒pMD-gL酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·序列测定结果分析 | 第29-31页 |
| ·序列测定 | 第29页 |
| ·核苷酸序列同源性比较 | 第29-30页 |
| ·推导氨基酸同源性比较 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 PRV gL基因原核表达和活性检测 | 第32-43页 |
| 1 材料与方法 | 第32-38页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·质粒、菌株及主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·主要溶液的配制 | 第32-34页 |
| ·方法 | 第34-38页 |
| ·原核表达引物设计 | 第34页 |
| ·PRV gL基因去信号肽亚克隆 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增产物电泳鉴定 | 第35页 |
| ·目的片段的回收连接转化 | 第35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·测序验证 | 第35页 |
| ·原核表达载体构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒转化 | 第36页 |
| ·重组质粒pET-gL-n的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组表达菌株的培养及表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| ·表达产物的免疫印迹 | 第37-38页 |
| 2 结果 | 第38-42页 |
| ·gL基因去信号肽(gL-n)的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·重组克隆质粒pMD-gL-n的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·去信号肽gL基因序列测定结果 | 第39-40页 |
| ·重组原核表达载体pET-gL-n的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE分析gL基因去信号肽的蛋白表达 | 第40-41页 |
| ·Western blot分析 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 PRV gL基因真核表达载体构建及免疫效力研究 | 第43-52页 |
| 1 材料和方法 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·主要溶液配制 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·转化及鉴定 | 第45页 |
| ·免疫效力研究 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-49页 |
| ·真核表达载体pCl-gL酶切鉴定 | 第47页 |
| ·表达gL基因的工程菌S.C500/PCl-gL的PCR鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·ELISA检测特异性抗体 | 第48页 |
| ·T淋巴细胞亚类数量测定 | 第48-49页 |
| ·攻毒保护实验 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-52页 |
| ·载体的选择 | 第49-50页 |
| ·运送载体和免疫途径的选择 | 第50页 |
| ·核酸疫苗诱导机体体液免疫反应 | 第50页 |
| ·T淋巴细胞水平与机体免疫状况 | 第50-51页 |
| ·攻毒后的保护情况 | 第51-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |