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表达树突状细胞激活因子重组狂犬病病毒的构建及其免疫学研究

摘要第1-7页
Abstract第7-11页
第一章 绪论第11-18页
   ·狂犬病第11-14页
     ·狂犬病病毒第12-13页
     ·病毒的复制第13页
     ·致病性第13-14页
   ·狂犬病疫苗第14-15页
   ·先天性免疫在狂犬病感染中的作用第15-18页
第二章 狂犬病病毒SAD L16 株反向遗传操作系统的建立第18-24页
   ·材料第18-20页
     ·病毒与血清第18页
     ·质粒和主要试剂第18-19页
     ·引物第19-20页
   ·方法第20-21页
     ·RV 完整cDNA 克隆的构建策略第20页
     ·重组质粒DNA 的大量制备及纯化第20页
     ·质粒DNA 纯度鉴定第20-21页
     ·转染及病毒拯救第21页
     ·免疫荧光检测第21页
   ·结果第21-23页
     ·RV 基因组完整 cDNA 转录模板的构建第21-22页
     ·带有转录单位的重组狂犬病病毒的救获第22页
     ·免疫荧光检测第22-23页
   ·讨论第23-24页
第三章 表达树突状细胞激活因子重组狂犬病的拯救及其生物学活性研究第24-39页
   ·材料第24-25页
     ·试剂第24页
     ·细胞第24页
     ·病毒第24页
     ·实验动物第24-25页
   ·方法第25-29页
     ·构建重组的狂犬病突变病毒的克隆第25页
     ·携带树突状细胞激活因子重组的狂犬病病毒克隆的构建第25-27页
     ·从cDNA 克隆上拯救病毒第27页
     ·反转录PCR 鉴定救获病毒第27页
     ·救获病毒的滴定第27页
     ·多步生长曲线的测定第27-28页
     ·用ELISA 方法对插入基因表达的检测第28页
     ·病毒在小鼠上的安全性试验第28页
     ·小鼠致病性的测定第28页
     ·小鼠的免疫和攻击实验第28-29页
     ·静脉中和抗体(VNA)实验第29页
     ·ELISA 检测基因的表达和RV 抗体亚型的鉴定第29页
   ·结果第29-37页
     ·重组病毒的构建及拯救第29-33页
     ·重组病毒的安全性研究第33-35页
     ·重组病毒的免疫原性研究第35-37页
       ·重组病毒疫苗免疫小鼠的中和抗体水平检测结果第35页
       ·重组病毒疫苗免疫小鼠ELISA 抗体亚型检测第35-36页
       ·小鼠免疫重组病毒后强毒攻击存活率第36-37页
   ·讨论第37-39页
第四章 重组狂犬病病毒免疫学研究第39-53页
   ·材料第39页
     ·仪器与软件第39页
     ·试剂第39页
     ·实验动物第39页
   ·方法第39-42页
     ·实时荧光定量PCR(QRT-PCR)第39-40页
     ·骨髓来源树突状细胞的制备第40页
     ·脾脏淋巴细胞悬液的制备第40-41页
     ·外周血淋巴细胞的预处理第41页
     ·淋巴细胞的荧光标记第41页
     ·流式细胞仪分析步骤第41-42页
   ·结果第42-50页
     ·免疫部位先天性免疫应答第42-44页
     ·感染了狂犬病病毒的小鼠腹股沟淋巴结和血液中的B 细胞的成熟第44-45页
     ·重组病毒感染小鼠后在腹股沟淋巴结和血液中的DC 的募集和活化第45-47页
     ·重组病毒感染小鼠后在腹股沟淋巴结和血液中的巨噬细胞的加强募集和活化第47页
     ·重组病毒感染小鼠后在淋巴结和血液中的CD4,CD8 和嗜中性粒细胞的募集第47-48页
     ·体外来源的骨髓的树突状细胞的成熟和活化第48-49页
     ·加载抗原后树突状细胞上清中IFN-α 的检测第49-50页
   ·讨论第50-53页
第五章 全文结论第53-54页
参考文献第54-61页
致谢第61-62页
作者简历第62-63页

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