摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-11页 |
第一章 绪论 | 第11-18页 |
·狂犬病 | 第11-14页 |
·狂犬病病毒 | 第12-13页 |
·病毒的复制 | 第13页 |
·致病性 | 第13-14页 |
·狂犬病疫苗 | 第14-15页 |
·先天性免疫在狂犬病感染中的作用 | 第15-18页 |
第二章 狂犬病病毒SAD L16 株反向遗传操作系统的建立 | 第18-24页 |
·材料 | 第18-20页 |
·病毒与血清 | 第18页 |
·质粒和主要试剂 | 第18-19页 |
·引物 | 第19-20页 |
·方法 | 第20-21页 |
·RV 完整cDNA 克隆的构建策略 | 第20页 |
·重组质粒DNA 的大量制备及纯化 | 第20页 |
·质粒DNA 纯度鉴定 | 第20-21页 |
·转染及病毒拯救 | 第21页 |
·免疫荧光检测 | 第21页 |
·结果 | 第21-23页 |
·RV 基因组完整 cDNA 转录模板的构建 | 第21-22页 |
·带有转录单位的重组狂犬病病毒的救获 | 第22页 |
·免疫荧光检测 | 第22-23页 |
·讨论 | 第23-24页 |
第三章 表达树突状细胞激活因子重组狂犬病的拯救及其生物学活性研究 | 第24-39页 |
·材料 | 第24-25页 |
·试剂 | 第24页 |
·细胞 | 第24页 |
·病毒 | 第24页 |
·实验动物 | 第24-25页 |
·方法 | 第25-29页 |
·构建重组的狂犬病突变病毒的克隆 | 第25页 |
·携带树突状细胞激活因子重组的狂犬病病毒克隆的构建 | 第25-27页 |
·从cDNA 克隆上拯救病毒 | 第27页 |
·反转录PCR 鉴定救获病毒 | 第27页 |
·救获病毒的滴定 | 第27页 |
·多步生长曲线的测定 | 第27-28页 |
·用ELISA 方法对插入基因表达的检测 | 第28页 |
·病毒在小鼠上的安全性试验 | 第28页 |
·小鼠致病性的测定 | 第28页 |
·小鼠的免疫和攻击实验 | 第28-29页 |
·静脉中和抗体(VNA)实验 | 第29页 |
·ELISA 检测基因的表达和RV 抗体亚型的鉴定 | 第29页 |
·结果 | 第29-37页 |
·重组病毒的构建及拯救 | 第29-33页 |
·重组病毒的安全性研究 | 第33-35页 |
·重组病毒的免疫原性研究 | 第35-37页 |
·重组病毒疫苗免疫小鼠的中和抗体水平检测结果 | 第35页 |
·重组病毒疫苗免疫小鼠ELISA 抗体亚型检测 | 第35-36页 |
·小鼠免疫重组病毒后强毒攻击存活率 | 第36-37页 |
·讨论 | 第37-39页 |
第四章 重组狂犬病病毒免疫学研究 | 第39-53页 |
·材料 | 第39页 |
·仪器与软件 | 第39页 |
·试剂 | 第39页 |
·实验动物 | 第39页 |
·方法 | 第39-42页 |
·实时荧光定量PCR(QRT-PCR) | 第39-40页 |
·骨髓来源树突状细胞的制备 | 第40页 |
·脾脏淋巴细胞悬液的制备 | 第40-41页 |
·外周血淋巴细胞的预处理 | 第41页 |
·淋巴细胞的荧光标记 | 第41页 |
·流式细胞仪分析步骤 | 第41-42页 |
·结果 | 第42-50页 |
·免疫部位先天性免疫应答 | 第42-44页 |
·感染了狂犬病病毒的小鼠腹股沟淋巴结和血液中的B 细胞的成熟 | 第44-45页 |
·重组病毒感染小鼠后在腹股沟淋巴结和血液中的DC 的募集和活化 | 第45-47页 |
·重组病毒感染小鼠后在腹股沟淋巴结和血液中的巨噬细胞的加强募集和活化 | 第47页 |
·重组病毒感染小鼠后在淋巴结和血液中的CD4,CD8 和嗜中性粒细胞的募集 | 第47-48页 |
·体外来源的骨髓的树突状细胞的成熟和活化 | 第48-49页 |
·加载抗原后树突状细胞上清中IFN-α 的检测 | 第49-50页 |
·讨论 | 第50-53页 |
第五章 全文结论 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
作者简历 | 第62-63页 |