| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 符号与缩写 | 第13-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-33页 |
| 1.1 吸烟与心血管疾病 | 第17-23页 |
| 1.1.1 吸烟与动脉粥样硬化 | 第17-20页 |
| 1.1.2 尼古丁与动脉粥样硬化 | 第20页 |
| 1.1.3 尼古丁与血管内皮细胞 | 第20-21页 |
| 1.1.4 尼古丁与血管平滑肌细胞 | 第21-22页 |
| 1.1.5 平滑肌细胞与动脉粥样硬化 | 第22-23页 |
| 1.2 尼古丁与Rho GTPase信号通路 | 第23-29页 |
| 1.2.1 Rho GTPases | 第23页 |
| 1.2.2 Rho effectors | 第23-27页 |
| 1.2.3 RhoGDIs | 第27-29页 |
| 1.3 尼古丁与microRNAs | 第29-30页 |
| 1.4 尼古丁与DNA甲基化调控 | 第30-31页 |
| 1.5 研究目的 | 第31-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-59页 |
| 2.1 实验仪器和材料 | 第33-36页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第34-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-59页 |
| 2.2.1 细胞培养及药物处理 | 第36-37页 |
| 2.2.2 血管平滑肌细胞的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.3 动物模型的建立 | 第38页 |
| 2.2.4 小鼠血管的苏木素-伊红染色 | 第38-39页 |
| 2.2.5 血管平滑肌细胞增殖检测(Cell Counting Kit-8,即CCK-8 检测) | 第39页 |
| 2.2.6 血管平滑肌细胞迁移检测(transwell检测) | 第39页 |
| 2.2.7 从细胞或组织中提取m RNA、microRNA及反转录 | 第39-41页 |
| 2.2.8 半定量PCR(Reverse Transcription PCR) | 第41-43页 |
| 2.2.9 荧光实时定量PCR检测(Quantitative Real-time PCR) | 第43-44页 |
| 2.2.10 从细胞或组织中提取蛋白 | 第44-45页 |
| 2.2.11 蛋白免疫印迹检测(Western Blotting) | 第45-47页 |
| 2.2.12 Rho GTPase活性检测 | 第47-48页 |
| 2.2.13 细胞荧光分析 | 第48-49页 |
| 2.2.14 小鼠血管的免疫组化检测 | 第49-50页 |
| 2.2.15 双荧光素酶报告检测 | 第50-54页 |
| 2.2.16 基因组DNA的抽提及重亚硫酸盐转化 | 第54-55页 |
| 2.2.17 重亚硫酸盐测序及甲基化特异性PCR(BSP测序及MSP验证) | 第55-58页 |
| 2.2.18 统计学分析 | 第58-59页 |
| 第三章 实验结果 | 第59-83页 |
| 3.1 血管平滑肌细胞的原代培养及纯度鉴定 | 第59-60页 |
| 3.2 体外实验条件的确定 | 第60-61页 |
| 3.3 Rho GTPase通路与尼古丁诱导的血管平滑肌细胞中细胞骨架蛋白的表达上调有关 | 第61-64页 |
| 3.4 尼古丁通过激活Rho GTPase通路上调细胞骨架蛋白的表达 | 第64-66页 |
| 3.5 尼古丁通过激活Rho GTPase通路促进血管平滑肌细胞的增殖与移行 | 第66-68页 |
| 3.6 尼古丁处理导致血管平滑肌细胞中Rho GDIA的转录水平上调、蛋白水平下调 | 第68-71页 |
| 3.7 尼古丁导致血管平滑肌细胞中microRNA-200b的表达上调 | 第71-72页 |
| 3.8 尼古丁引发miR-200b基因启动子区的低甲基化 | 第72-78页 |
| 3.9 MiR-200b介导的RhoGTPase通路的活性上调促进了血管平滑肌细胞的迁移与增殖 | 第78-83页 |
| 第四章 讨论 | 第83-90页 |
| 第五章 全文总结 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 附录一 主要实验试剂的配制方法 | 第104-112页 |
| 附录二 组织贴壁法分离并培养血管平滑肌细胞步骤 | 第112-113页 |
| 附录三 分离胶与浓缩胶配方 | 第113-115页 |
| 附图 | 第115-116页 |
| 攻读博士期间发表文章 | 第116-118页 |
