| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 真菌的遗传操作 | 第12-30页 |
| 一 真菌的研究价值以及真菌遗传操作的重要意义 | 第12-13页 |
| 二 真菌遗传操作的方法 | 第13-30页 |
| 1 基因敲除 | 第13-20页 |
| 1.1 原生质体转化 | 第13-17页 |
| 1.2 农杆菌介导转化 | 第17-19页 |
| 1.3 电击穿孔转化法 | 第19页 |
| 1.4 基因枪法 | 第19-20页 |
| 2 基因异源表达 | 第20-21页 |
| 3 RNA干扰 | 第21-24页 |
| 4 CRISPR-Cas9 | 第24-30页 |
| 第二章 少孢节丛孢中三个生物合成相关基因的功能鉴定 | 第30-84页 |
| 一 目的基因的预测筛选 | 第31-34页 |
| 1 预测分析方法 | 第31页 |
| 2 预测结果 | 第31-34页 |
| 2.1 少孢节丛孢中生物合成基因及筛选 | 第31页 |
| 2.2 所选基因的氨基酸序列分析以及系统发育树分析 | 第31-34页 |
| 二 目的基因载体的构建及敲除 | 第34-47页 |
| 1 实验材料 | 第34-39页 |
| 1.1 供试质粒 | 第34-35页 |
| 1.2 主要试剂及试剂盒 | 第35-36页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第36页 |
| 1.4 供试培养基及溶液 | 第36-38页 |
| 1.5 载体构建以及同源重组替换示意图 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-45页 |
| 2.1 构建载体所用引物 | 第39-41页 |
| 2.2 敲除载体构建 | 第41-44页 |
| 2.2.1 质粒选择 | 第41-42页 |
| 2.2.2 片段扩增及纯化 | 第42页 |
| 2.2.3 上下游片段插入载体及其验证 | 第42-44页 |
| 2.3 原生质体制备及转化 | 第44-45页 |
| 2.4 转化子PCR验证 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-47页 |
| 三 少孢节丛孢突变菌株的表型特征及代谢图谱分析 | 第47-81页 |
| 1 实验材料 | 第47-48页 |
| 1.1 供试菌株及线虫 | 第47-48页 |
| 1.2 仪器与设备 | 第48页 |
| 1.3 主要试剂和材料 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-51页 |
| 2.1 少孢节丛孢突变菌株与野生菌株生长速率的比较 | 第48-49页 |
| 2.2 少孢节丛孢突变菌株与野生菌株产孢量和孢子萌发率的比较 | 第49页 |
| 2.3 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株捕食能力的比较 | 第49-50页 |
| 2.4 PDB发酵培养及样品处理 | 第50页 |
| 2.5 高效液相色谱(HPLC)检测 | 第50-51页 |
| 2.6 气相色谱质谱(GC-MS)检测 | 第51页 |
| 3 实验结果与分析 | 第51-81页 |
| 3.1 突变菌株△80g313与野生菌株在表型特征及代谢图谱的比较和分析 | 第51-61页 |
| 3.2 突变菌株△215g294与野生菌株在表型特征及代谢图谱的比较和分析 | 第61-71页 |
| 3.3 突变菌株△173g162与野生菌株在表型特征及代谢图谱的比较和分析 | 第71-81页 |
| 四 小结与讨论 | 第81-84页 |
| 第三章 高温真菌疏绵状嗜热丝孢菌突变菌株的构建 | 第84-119页 |
| 一 目的基因的预测分析及筛选 | 第85-94页 |
| 1 预测分析方法 | 第85页 |
| 2 预测结果 | 第85-94页 |
| 2.1 高温真菌中生物合成基因 | 第85页 |
| 2.2 基因筛选 | 第85-87页 |
| 2.3 所选基因保守域分析以及系统发育树分析 | 第87-94页 |
| 二 目的基因载体的构建及敲除 | 第94-117页 |
| 1 实验材料 | 第94-99页 |
| 1.1 供试菌株,主要试剂及设备 | 第94页 |
| 1.2 供试培养基及溶液 | 第94-95页 |
| 1.3 载体构建以及同源重组替换示意图 | 第95-99页 |
| 2 实验方法 | 第99-104页 |
| 2.1 构建载体所需引物 | 第99-103页 |
| 2.2 敲除载体构建 | 第103-104页 |
| 2.2.1 质粒选择 | 第103页 |
| 2.2.2 片段扩增及纯化 | 第103页 |
| 2.2.3 上下游片段插入载体及其验证 | 第103-104页 |
| 3 试验方法 | 第104-112页 |
| 3.1 质粒转化农杆菌感受态 | 第104页 |
| 3.2 农杆菌介导转化 | 第104-105页 |
| 3.3 转化子PCR验证 | 第105页 |
| 3.4 高温真菌突变株筛选验证 | 第105-112页 |
| 4 实验结果 | 第112-117页 |
| 三 总结与讨论 | 第117-119页 |
| 全文总结 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
