| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第9-24页 |
| 1.1 植物营养贮存蛋白 | 第9-13页 |
| 1.1.1 植物营养贮存蛋白简介 | 第9-11页 |
| 1.1.2 拟南芥营养贮存蛋白 | 第11-13页 |
| 1.2 HAD (haloacid dehalogenase)超家族 | 第13-17页 |
| 1.2.1 HAD (haloacid dehalogenase)超家族酶活性质 | 第13-14页 |
| 1.2.2 HAD超家族的分类及结构 | 第14-17页 |
| 1.3 结构生物学 | 第17-24页 |
| 1.3.1 蛋白质晶体学 | 第17-22页 |
| 1.3.2 蛋白质结构测定的步骤 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验主要试剂配方 | 第25-26页 |
| 2.1.4 实验主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 拟南芥VSP1甲硫氨酸突变体的构建 | 第27-30页 |
| 2.2.2 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物的制备 | 第30-33页 |
| 2.2.3 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物的性质分析 | 第33-34页 |
| 2.2.4 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物的晶体生长 | 第34页 |
| 2.2.5 拟南芥VSP1硒代蛋白晶体的数据收集及结构解析 | 第34-35页 |
| 2.2.6 拟南芥VSP1与二价金属离子Mg~(2+)Cu~(2+)的共晶生长 | 第35页 |
| 2.2.7 拟南芥VSP1的活性测定 | 第35-38页 |
| 第三章 实验结果 | 第38-53页 |
| 3.1 拟南芥VSP1甲硫氨酸突变体的构建 | 第38页 |
| 3.2 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物的制备 | 第38-40页 |
| 3.2.1 拟南芥VSP1甲硫氨酸突变体的试表达 | 第38-39页 |
| 3.2.2 拟南芥VSP1硒代蛋白的表达纯化 | 第39-40页 |
| 3.3 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物的性质分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物聚集状态分析 | 第40-41页 |
| 3.3.2 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物均一性分析 | 第41-42页 |
| 3.3.3 拟南芥VSP1硒代蛋白的圆二色谱分析 | 第42-43页 |
| 3.4 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物的晶体生长 | 第43-44页 |
| 3.4.1 拟南芥VSP1硒代蛋白晶体的初筛 | 第43-44页 |
| 3.4.2 拟南芥VSP1硒代蛋白晶体的优化 | 第44页 |
| 3.5 拟南芥VSP1硒代蛋白晶体的数据收集 | 第44-45页 |
| 3.6 拟南芥VSP1与二价金属离子Mg~(2+)Cu~(2+)的共晶生长 | 第45-47页 |
| 3.6.1 拟南芥VSP1与二价金属离子Mg~(2+)的共晶生长 | 第45-46页 |
| 3.6.2 拟南芥VSP1与二价金属离子Cu~(2+)的共晶生长 | 第46-47页 |
| 3.7 拟南芥VSP1的晶体结构分析 | 第47-49页 |
| 3.7.1 拟南芥VSP1的晶体结构 | 第47-48页 |
| 3.7.2 拟南芥VSP1的晶体结构的活性位点 | 第48-49页 |
| 3.8 拟南芥VSP蛋白的活性测定 | 第49-53页 |
| 3.8.1 拟南芥VSP蛋白底物特异性的测定 | 第49-50页 |
| 3.8.2 拟南芥vspi抑制剂的测定 | 第50页 |
| 3.8.3 拟南芥VSP1蛋白抑制剂的动力学常数测定 | 第50-53页 |
| 第四章 讨论 | 第53-60页 |
| 4.1 拟南芥VSP1硒代蛋白衍生物的制备 | 第53页 |
| 4.2 VSP1与二价金属离子Mg~(2+) Cu~(2+)的共晶生长 | 第53-54页 |
| 4.3 拟南芥VSP1晶体结构分析 | 第54-58页 |
| 4.3.1 拟南芥VSP1是植物酸性磷酸酶中解析出的第一个晶体结构 | 第54-55页 |
| 4.3.2 拟南芥VSP1结构在DDDD超家族真核生物成员中具有代表性 | 第55-57页 |
| 4.3.3 VSP1蛋白与P4蛋白的活性位点比较 | 第57-58页 |
| 4.4 VSP酶活性质分析 | 第58-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 缩略词表 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-73页 |
| 附录Ⅰ: 拟南芥VSP1 mRNA与蛋白序列 | 第67-69页 |
| 1.1 拟南芥VSP1 mRNA序列 | 第67页 |
| 1.2 拟南芥VSP1蛋白序列 | 第67-69页 |
| 附录Ⅱ: Crystal Screen and Crystal Screen 2晶体生长条件 | 第69-71页 |
| 2.1 Crystal Screen晶体生长条件 | 第69-70页 |
| 2.2 Crystal Screen2晶体生长条件 | 第70-71页 |
| 附录Ⅲ: 相关抑制剂结构式 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第74页 |
