| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 达氏鳇概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 分类地位 | 第10页 |
| 1.1.2 地理分布 | 第10页 |
| 1.1.3 生存环境 | 第10页 |
| 1.1.4 体态食性 | 第10-11页 |
| 1.1.5 生长繁殖 | 第11页 |
| 1.1.6 价值 | 第11页 |
| 1.1.7 资源现状 | 第11页 |
| 1.1.8 研究现状 | 第11-12页 |
| 1.1.9 开发利用前景 | 第12页 |
| 1.2 生长激素概述 | 第12-17页 |
| 1.2.1 GH/PRL/SL家族 | 第12-13页 |
| 1.2.2 GH的结构 | 第13-14页 |
| 1.2.3 GH的合成、分泌和释放 | 第14页 |
| 1.2.4 GH的生理功能 | 第14-15页 |
| 1.2.4.1 促生长作用 | 第14页 |
| 1.2.4.2 渗透调节作用 | 第14-15页 |
| 1.2.4.3 参与应激反应 | 第15页 |
| 1.2.4.4 与其它激素的相互作用 | 第15页 |
| 1.2.4.5 其它作用 | 第15页 |
| 1.2.5 GH的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2.6 GH的研究现状 | 第16页 |
| 1.2.7 GH在水产养殖中的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 本文的研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 达氏鳇GH全长cDNA的克隆 | 第18-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第18-19页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要实验试剂的配制 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 达氏鳇总RNA的提取及检测 | 第20-21页 |
| 2.2.1.1 达氏鳇总RNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.1.2 达氏鳇总RNA的检测 | 第20-21页 |
| 2.2.2 达氏鳇GH基因中间片段的获得 | 第21-24页 |
| 2.2.2.1 反转录（RT）反应 | 第21页 |
| 2.2.2.2 特异性引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2.2.3 目的片段扩增 | 第22页 |
| 2.2.2.4 PCR产物回收纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.2.5 TA克隆 | 第23页 |
| 2.2.2.6 菌落PCR检测及测序 | 第23-24页 |
| 2.2.3 达氏鳇GH基因 5’、3’端克隆 | 第24-28页 |
| 2.2.3.1 RACE引物设计 | 第24页 |
| 2.2.3.2 RACE-Ready cDNA的准备 | 第24-26页 |
| 2.2.3.3 快速扩增cDNA末端（RACE） | 第26-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-30页 |
| 2.3.1 达氏鳇总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.3.2 达氏鳇GH基因中间片段的获得 | 第28-29页 |
| 2.3.3 达氏鳇GH基因全长序列的克隆 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第32-44页 |
| 3.1 分析工具 | 第32页 |
| 3.2 分析方法 | 第32页 |
| 3.3 分析结果 | 第32-42页 |
| 3.3.1 达氏鳇GH基因的基本信息 | 第33-34页 |
| 3.3.2 氨基酸同源性分析 | 第34-36页 |
| 3.3.3 疏水性分析 | 第36-37页 |
| 3.3.4 跨膜区分析 | 第37页 |
| 3.3.5 信号肽分析 | 第37-39页 |
| 3.3.6 亚细胞定位 | 第39页 |
| 3.3.7 功能位点预测 | 第39-40页 |
| 3.3.8 二级结构分析 | 第40页 |
| 3.3.9 三级结构预测 | 第40-41页 |
| 3.3.10 构建GH系统进化树 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 达氏鳇GH基因荧光定量分析 | 第44-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第44页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第44-45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 4.2.1 组织表达检测方法 | 第45页 |
| 4.2.2 达氏鳇总RNA的提取与检测 | 第45-46页 |
| 4.2.2.1 达氏鳇总RNA的提取 | 第45-46页 |
| 4.2.2.2 达氏鳇总RNA的检测 | 第46页 |
| 4.2.3 cNDA第一链的合成 | 第46页 |
| 4.2.4 引物设计 | 第46-47页 |
| 4.2.5 实时荧光定量 | 第47-48页 |
| 4.3 实验结果 | 第48-49页 |
| 4.3.1 达氏鳇各组织总RNA的提取 | 第48页 |
| 4.3.2 达氏鳇GH基因各组织特异性表达结果 | 第48-49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 达氏鳇GH基因的原核表达 | 第51-63页 |
| 5.1 实验材料 | 第51-53页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第51页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第51页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第51-52页 |
| 5.1.4 主要实验试剂的配制 | 第52-53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-58页 |
| 5.2.1 达氏鳇总RNA的提取及检测 | 第53页 |
| 5.2.1.1 达氏鳇总RNA的提取 | 第53页 |
| 5.2.1.2 达氏鳇总RNA的检测 | 第53页 |
| 5.2.2 cDNA第一链的合成 | 第53页 |
| 5.2.3 引物设计 | 第53页 |
| 5.2.4 目的片段（ORF）的扩增及回收纯化 | 第53-54页 |
| 5.2.5 构建重组表达载体Blunt E1-ORF | 第54页 |
| 5.2.6 菌落PCR检测及测序 | 第54-55页 |
| 5.2.7 质粒提取 | 第55-56页 |
| 5.2.8 重组质粒转化BL21（DE3） | 第56页 |
| 5.2.9 蛋白诱导表达 | 第56-58页 |
| 5.2.9.1 表达形式的分析 | 第56页 |
| 5.2.9.2 SDS-PAGE电泳 | 第56-57页 |
| 5.2.9.3 表达条件的优化 | 第57-58页 |
| 5.3 实验结果 | 第58-61页 |
| 5.3.1 目的片段（ORF）的扩增 | 第58页 |
| 5.3.2 表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 5.3.3 表达载体BL21（DE3）转化结果 | 第59页 |
| 5.3.4 蛋白诱导表达 | 第59-61页 |
| 5.3.4.1 表达形式分析 | 第59-60页 |
| 5.3.4.2 表达条件优化 | 第60-61页 |
| 5.4 讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第74-77页 |
| 致谢 | 第77页 |