| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 4-羟基异亮氨酸概述 | 第8页 |
| 1.2 4-羟基异亮氨酸的功能和制备方法 | 第8-11页 |
| 1.2.1 促进胰岛细胞分泌胰岛素 | 第8-9页 |
| 1.2.2 降低并改善胰岛素抵抗 | 第9页 |
| 1.2.3 促进脂肪代谢,调节血脂异常 | 第9页 |
| 1.2.4 4-羟基异亮氨酸的制备方法 | 第9-11页 |
| 1.3 L-异亮氨酸双加氧酶的概况 | 第11-12页 |
| 1.4 酶的分子改造技术研究进展 | 第12-14页 |
| 1.4.1 理性设计 | 第13页 |
| 1.4.2 非理性设计 | 第13-14页 |
| 1.5 本论文的研究背景和意义 | 第14-15页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第16-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 实验主要引物 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要工具酶和试剂 | 第18页 |
| 2.2 培养条件 | 第18页 |
| 2.2.1 培养基配方 | 第18页 |
| 2.2.2 培养方法 | 第18页 |
| 2.3 缓冲液和相关试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2.3.1 蛋白纯化缓冲液 | 第18-19页 |
| 2.3.2 易错PCR相关缓冲液 | 第19页 |
| 2.3.3 纸层析展开剂配方 | 第19页 |
| 2.3.4 全细胞反应液 | 第19页 |
| 2.4 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.4.1 基本分子操作 | 第19-20页 |
| 2.4.2 pET28a-ido质粒的构建 | 第20-21页 |
| 2.4.3 ido的定点突变 | 第21页 |
| 2.4.4 ido的随机突变 | 第21-22页 |
| 2.4.5 Ido的表达和纯化 | 第22-23页 |
| 2.4.6 Ido的酶学性质分析 | 第23-24页 |
| 2.4.7 重组菌的全细胞转化测定 | 第24页 |
| 2.4.8 氨基酸含量的测定 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-39页 |
| 3.1 Ido的表达和纯化 | 第25-28页 |
| 3.1.1 ido的扩增和大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-ido的构建 | 第25-26页 |
| 3.1.2 Ido的表达和纯化 | 第26页 |
| 3.1.3 Ido的酶学性质 | 第26-28页 |
| 3.2 Ido的定向进化 | 第28-31页 |
| 3.2.1 突变体文库的构建 | 第28-29页 |
| 3.2.2 突变体文库的筛选 | 第29-31页 |
| 3.2.3 突变体的催化动力学 | 第31页 |
| 3.3 Ido的定点突变 | 第31-34页 |
| 3.4 Ido的组合突变 | 第34-36页 |
| 3.4.1 有益突变位点的组合及酶学性质 | 第34-35页 |
| 3.4.2 IdoN126H/T130K的最适温度、pH及其各自的稳定性 | 第35-36页 |
| 3.5 idoN126H/T130K表达菌株与ido表达菌株的全细胞转化 | 第36-39页 |
| 3.5.1 idoN126H/T130K表达菌与ido表达菌的全细胞转化 | 第36-37页 |
| 3.5.2 idoN126H/T130K表达菌全细胞转化条件的优化 | 第37-39页 |
| 主要结论与展望 | 第39-41页 |
| 主要结论 | 第39-40页 |
| 展望 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
