| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-25页 |
| 1.1 小分子RNA(microRNAs) | 第16-19页 |
| 1.1.1 简介 | 第16-18页 |
| 1.1.2 miR-200家族成员的组成和功能 | 第18-19页 |
| 1.2 激活转录因子5(ATF5) | 第19-21页 |
| 1.2.1 ATF5的基本分子结构性质 | 第19-20页 |
| 1.2.2 ATF5在神经发育和神经肿瘤中的作用 | 第20-21页 |
| 1.3 腺苷酸环化酶3(AC3) | 第21-22页 |
| 1.3.1 腺苷酸环化酶(AC)的结构与功能 | 第21-22页 |
| 1.3.2 腺苷酸环化酶3(AC3)的功能简介 | 第22页 |
| 1.4 TET蛋白以及家族成员 | 第22-24页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 第2章 miR-200a靶基因的确定 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.2 试剂和溶液 | 第26-27页 |
| 2.1.3 细胞株 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 生物信息学预测miR-200a靶标 | 第27-28页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第28页 |
| 2.2.3 荧光素报告基因质粒的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.4 miR-200a mimic与报告基因载体共转染Hela细胞 | 第31页 |
| 2.2.5 miR-200a mimic/NC或inhibitor/NC转染3T3细胞和CT26细胞 | 第31-32页 |
| 2.2.6 Trizol法提取细胞总RNA | 第32页 |
| 2.2.7 miRNA cDNA第一链的合成 | 第32页 |
| 2.2.8 qRT-PCR检测miR-200a表达情况 | 第32页 |
| 2.2.9 cDNA的合成 | 第32-33页 |
| 2.2.10 qRT-PCR检测ATF5表达情况 | 第33页 |
| 2.2.11 细胞总蛋白的提取以及浓度的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.12 Western-blot检测ATF5蛋白表达情况 | 第34-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-40页 |
| 2.3.1 miR-200a靶标的预测 | 第36页 |
| 2.3.2 miR-200a对ATF5基因荧光素酶活性的影响 | 第36-37页 |
| 2.3.3 miR-200a mimic/inhibitor转染效率 | 第37-38页 |
| 2.3.4 转染miR-200a mimic/inhibitor后ATF5基因的表达 | 第38-40页 |
| 第3章 转录因子ATF5对AC3基因调控机制的探究 | 第40-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 仪器 | 第40页 |
| 3.1.2 试剂 | 第40页 |
| 3.1.3 细胞株 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 ATF5质粒载体转染3T3-L1细胞,G418药筛 | 第40-41页 |
| 3.2.2 3T3-L1细胞总RNA提取 | 第41页 |
| 3.2.3 qRT-PCR检测ATF5和AC3表达情况 | 第41页 |
| 3.2.4 Western-blot检测ATF5和AC3蛋白表达情况 | 第41页 |
| 3.2.5 生物信息学预测ATF5与AC3结合位点 | 第41页 |
| 3.2.6 AC3启动子区不同片段大小质粒载体的构建 | 第41页 |
| 3.2.7 AC3启动子区不同片段大小质粒载体与ATF5共转染,检测荧光素酶活性 | 第41-42页 |
| 3.2.8 染色质免疫共沉淀检测ATF5和AC3结合情况 | 第42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-46页 |
| 3.3.1 转染ATF5质粒载体后ATF5和AC3基因的mRNA表达情况 | 第42-43页 |
| 3.3.2 转染ATF5质粒载体后ATF5和AC3基因的蛋白表达情况 | 第43-44页 |
| 3.3.3 ATF5基因对AC3启动子区不同片段大小质粒荧光素酶的活性的影响 | 第44页 |
| 3.3.4 ATF5基因与AC3基因启动子区结合 | 第44-46页 |
| 第4章 TET3对miR-200a启动子区调控机制的探究 | 第46-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.1.1 仪器 | 第46页 |
| 4.1.2 试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 细胞株 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 Tet3-siRNA转染3T3细胞 | 第46-47页 |
| 4.2.2 qRT-PCR检测TET3敲低后表达情况 | 第47页 |
| 4.2.3 WB检测TET3敲低后表达情况 | 第47页 |
| 4.2.4 提取基因组DNA | 第47页 |
| 4.2.5 miR-200a启动子区甲基化水平测定 | 第47-48页 |
| 4.3 实验结果 | 第48-51页 |
| 4.3.1 转染Tet3-siRNA后TET3基因mRNA表达水平 | 第48-49页 |
| 4.3.2 TET3敲低后蛋白水平 | 第49页 |
| 4.3.3 TET3对miR-200a启动子区甲基化的影响 | 第49-51页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 读研期间发表的论文 | 第62页 |
