| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第1章 序言 | 第12-18页 |
| 1.1 植物倍半萜合酶的催化机制 | 第12-13页 |
| 1.2 烟草马兜铃烯合酶简介 | 第13-15页 |
| 1.3 黄花蒿没药醇合酶简介 | 第15-16页 |
| 1.4 NSE/DTE基序上游第四氨基酸突变对AaADS酶学特性影响的研究进展 | 第16-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-24页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要溶液与试剂 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 序列比对 | 第20-21页 |
| 2.2.2 点突变设计 | 第21页 |
| 2.2.3 大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化 | 第21页 |
| 2.2.4 质粒提取 | 第21页 |
| 2.2.5 大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| 2.2.6 大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞的转化,方法同2.2. | 第22页 |
| 2.2.7 蛋白表达和纯化 | 第22页 |
| 2.2.8 孔雀绿测定无机磷酸含量法测定倍半萜合酶动力学常数 | 第22-23页 |
| 2.2.9 蛋白酶体外催化 | 第23-24页 |
| 第3章 NSE/DTE基序上游第四氨基酸突变对NtEAS的影响 | 第24-37页 |
| 3.1 菌种、载体和试剂 | 第24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-26页 |
| 3.2.1 NtEAS基因点突变设计 | 第24-25页 |
| 3.2.2 定点诱变 | 第25页 |
| 3.2.3 大肠杆菌表达和纯化 | 第25页 |
| 3.2.4 蛋白酶体外催化分析 | 第25-26页 |
| 3.2.5 蛋白酶动力学测定 | 第26页 |
| 3.3 结果 | 第26-34页 |
| 3.3.1 测序结果 | 第26-27页 |
| 3.3.2 NtEAS野生型及其突变体质粒大肠杆菌表达和纯化 | 第27页 |
| 3.3.3 NtEAS野生型及其突变体体外催化(E,E)-FPP产物分析 | 第27-30页 |
| 3.3.4 NtEAS野生型及其突变体体外催化(R,E)-NPP产物分析 | 第30页 |
| 3.3.5 NtEAS野生型及其突变体体外催化(S,E)-NPP产物分析 | 第30-32页 |
| 3.3.6 NtEAS野生型及其突变体体外催化(Z,E)-FPP产物分析 | 第32-33页 |
| 3.3.7 NtEAS野生型及其突变体蛋白酶酶活性分析 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-37页 |
| 第4章 NSE/DTE基序上游第四氨基酸突变对AaBOS的影响 | 第37-47页 |
| 4.1 菌株、载体和试剂 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 AaBOS基因点突变位点设计 | 第37-38页 |
| 4.2.2 定点诱变 | 第38页 |
| 4.2.3 大肠杆菌感受态细胞表达纯化 | 第38页 |
| 4.2.4 蛋白酶体外催化分析 | 第38-39页 |
| 4.2.5 蛋白酶动力学测定 | 第39页 |
| 4.3 实验结果 | 第39-45页 |
| 4.3.1 测序结果 | 第39-40页 |
| 4.3.2 AaBOS野生型及其突变体质粒大肠杆菌表达和纯化 | 第40-41页 |
| 4.3.3 AaBOS野生型及其突变体蛋白酶体外催化(E,E)-FPP产物分析 | 第41-42页 |
| 4.3.4 AaBOS野生型及其突变体蛋白酶体外催化(R,E)-NPP产物分析 | 第42-43页 |
| 4.3.5 AaBOS野生型及其突变体蛋白酶体外催化(Z,E)-FPP产物分析 | 第43-44页 |
| 4.3.6 AaBOS野生型及其突变体蛋白酶动力学结果分析 | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第5章 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第56页 |
