| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第10-30页 |
| 1.1 非洲爪蛙胚胎的早期发育过程简介 | 第10-13页 |
| 1.2 Spemann organizer 与胚胎背腹体轴决定 | 第13-14页 |
| 1.3 母源 Wnt/β-catenin 信号诱导 Spemann organizer 形成 | 第14-16页 |
| 1.4 胚层的形成 | 第16-22页 |
| 1.4.1 中胚层诱导信号 | 第17-18页 |
| 1.4.2 TGFβ信号通路在中胚层形成中的作用 | 第18-20页 |
| 1.4.3 FGF 信号通路在中胚层形成中的作用 | 第20-21页 |
| 1.4.4 Nodal 信号通路与 FGF 信号通路在中胚层形成中的相互关系 | 第21-22页 |
| 1.5 Wnt/PCP 信号通路对汇聚延伸运动的调控 | 第22-28页 |
| 1.5.1 原肠运动细胞行为简介 | 第22页 |
| 1.5.2 汇聚延伸运动 | 第22-24页 |
| 1.5.3 Wnt/PCP 信号通路对汇聚延伸运动的调控研究进展 | 第24-28页 |
| 1.6 NEDD4L 简介 | 第28-29页 |
| 1.6.1 NEDD4L 蛋白的结构域组成 | 第28页 |
| 1.6.2 NEDD4L 功能的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.7 课题研究目的 | 第29-30页 |
| 第2章 材料与方法 | 第30-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-45页 |
| 2.2.1 爪蛙胚胎的体外授精技术与培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2 体外转录获得 mRNA | 第31-32页 |
| 2.2.3 显微注射技术 | 第32-33页 |
| 2.2.4 胚胎组织分离技术 | 第33-34页 |
| 2.2.5 荧光标记技术 | 第34-35页 |
| 2.2.6 爪蛙胚胎总 RNA 提取，转录及 RT-PCR 分析 | 第35-38页 |
| 2.2.7 原位杂交技术 | 第38-41页 |
| 2.2.8 免疫印迹杂交技术 | 第41-43页 |
| 2.2.9 爪蛙胚胎免疫共沉淀技术 | 第43-44页 |
| 2.2.10 细胞培养与生化分析技术 | 第44-45页 |
| 第3章 爪蛙 NEDD4L 基因的同源性与表达谱分析 | 第45-49页 |
| 3.1 爪蛙 NEDD4L 基因与哺乳类 NEDD4L 基因具有高度同源性 | 第45页 |
| 3.2 爪蛙 NEDD4L 表达图谱分析 | 第45-48页 |
| 3.3 小结 | 第48-49页 |
| 第4章 过量表达外源 NEDD4L 的功能分析 | 第49-53页 |
| 4.1 过量表达爪蛙 NEDD4L 的功能分析 | 第49-51页 |
| 4.2 过量表达人源 NEDD4L 的功能分析 | 第51-52页 |
| 4.3 小结 | 第52-53页 |
| 第5章 NEDD4L 功能缺失分析 | 第53-64页 |
| 5.1 NEDD4L 功能缺失的整体胚胎表型分析 | 第53-58页 |
| 5.1.1 NEDD4L 敲低导致原肠运动和神经管闭合缺陷 | 第53-57页 |
| 5.1.2 NEDD4L 功能缺失的特异性鉴定 | 第57-58页 |
| 5.2 NEDD4L 对于爪蛙早期胚胎的中胚层诱导和汇聚延伸运动的正常进行是必需的 | 第58-62页 |
| 5.2.1 整体胚胎注射 NEDD4L MO 对中胚层标记基因表达的影响分析 | 第58-59页 |
| 5.2.2 NEDD4L 在背方组织的功能缺失不影响胚胎背腹极性的建立 | 第59-60页 |
| 5.2.3 利用动物极帽实验验证 NEDD4L 调控汇聚延伸运动的特异性 | 第60-61页 |
| 5.2.4 利用 Nieuwkoop 重组体实验验证 NEDD4L 调控汇聚延伸运动的特异性 | 第61-62页 |
| 5.3 小结 | 第62-64页 |
| 第6章 NEDD4L 通过 Dvl2 调控汇聚延伸运动 | 第64-71页 |
| 6.1 Dvl2 部分敲低可以拯救 NEDD4L MO 导致的原肠运动缺陷 | 第64-65页 |
| 6.2 通过 Keller’s explant 拯救实验鉴定 NEDD4L 与 Dvl2 的互作 | 第65-66页 |
| 6.3 通过 Nieuwkoop 重组体拯救实验鉴定 NEDD4L 与 Dvl2 的互作 | 第66-67页 |
| 6.4 Dvl2 的部分敲低可以拯救 NEDD4L MO 导致的背方中胚层细胞的极性丧失 | 第67-68页 |
| 6.5 NEDD4L 对中胚层诱导的调控不依赖于其对 Dvl2 蛋白稳定性的影响 | 第68-70页 |
| 6.6 小结 | 第70-71页 |
| 第7章 NEDD4L 通过直接结合 Dvl2 对其进行泛素化降解 | 第71-77页 |
| 7.1 NEDD4L 与 Dvl2 之间存在直接相互作用 | 第71-72页 |
| 7.2 NEDD4L 通过泛素化-蛋白酶体途径降解 Dvl2 蛋白 | 第72-73页 |
| 7.3 运用 Dvl2-GFP 在爪蛙胚胎中检测 NEDD4L 对 Dvl2 蛋白稳定性的调控 | 第73-76页 |
| 7.4 小结 | 第76-77页 |
| 第8章 NEDD4L 对 Wnt/PCP 信号通路中 Dvl2 下游关键转导组件的活性调控 | 第77-80页 |
| 8.1 NEDD4L 可以调控 Wnt/PCP 信号通路下游 RhoA 和 Rac1 的活性 | 第77-78页 |
| 8.2 RhoA- V14 可以对 NEDD4L 功能缺失导致的背方中胚层细胞极性丧失的表型进行拯救 | 第78-79页 |
| 8.3 小结 | 第79-80页 |
| 第9章 NEDD4L 对中胚层形成的影响的初步研究 | 第80-85页 |
| 9.1 NEDD4L 对 Xbra 表达的影响分析 | 第80-81页 |
| 9.2 利用动物极帽实验分析 NEDD4L MO 对 Xnr1、FGF8 和 Wnt8 诱导信号响应性的影响 | 第81-84页 |
| 9.2.1 NEDD4L 对 Xbra 的调控不依赖于 Xnr1 诱导的 Nodal 信号通路 | 第81-82页 |
| 9.2.2 NEDD4L 对 Xbra 的调控依赖 FGF 信号通路 | 第82-83页 |
| 9.2.3 NEDD4L 不影响 Wnt8 诱导的经典 Wnt 信号通路活性 | 第83-84页 |
| 9.3 小结 | 第84-85页 |
| 第10章 讨论与展望 | 第85-90页 |
| 10.1 NEDD4L 在中胚层图式建成中的重要功能 | 第85-86页 |
| 10.2 NEDD4L 在脊椎动物早期胚胎发育中的功能 | 第86-88页 |
| 10.3 NEDD4L 通过 Dvl2 对经典和非经典 Wnt 信号进行调控 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第104页 |
