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PCV2的分子流行病学分析及PCV2嵌合重组病毒的制备

CONTENTS第5-8页
摘要第8-9页
Abstract第9页
1 前言第11-21页
    1.1 PCV2的分子特征第11-12页
    1.2 PCV2和其它猪源病毒的混合感染第12-15页
        1.2.1 猪细环病毒第12页
        1.2.2 猪细小病毒第12-13页
        1.2.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒第13-14页
        1.2.4 猪流行性腹泻病毒第14页
        1.2.5 猪流感病毒第14页
        1.2.6 猪圆环病毒Ⅰ型第14-15页
        1.2.7 猪博卡样病毒第15页
    1.3 PCV2的自然重组第15-16页
    1.4 PCV2与免疫之间的关系第16-20页
        1.4.1 PCV2感染与先天性免疫的关系第16-17页
        1.4.2 PCV2核酸的免疫调节作用第17页
        1.4.3 PCV2的免疫平衡机制第17-18页
        1.4.4 PCV2感染与体液免疫应答的关系第18-19页
        1.4.5 PCV2感染与细胞免疫反应的关系第19-20页
    1.5 研究的目的与意义第20-21页
2 材料与方法第21-35页
    2.1 实验材料第21-22页
        2.1.1 样品的采集第21页
        2.1.2 实验动物、细胞和菌株第21页
        2.1.3 常用的生化试剂第21页
        2.1.4 主要的仪器设备第21-22页
    2.2 PCV2感染的分子流行病学调查第22-25页
        2.2.1 样品总DNA的提取第22页
        2.2.2 引物设计第22页
        2.2.3 PCR的扩增第22-23页
        2.2.4 PCV2 ORF2的克隆第23-24页
        2.2.5 PCV-2的序列分析第24-25页
    2.3 PCV2分离株的基因型分析第25-26页
        2.3.1 引物设计第25页
        2.3.2 全基因组的PCR扩增第25页
        2.3.3 全基因组的克隆第25页
        2.3.4 基因型分析第25-26页
        2.3.5 PCV2分离株的重组分析第26页
    2.4 PCV2嵌合病毒的建立第26-35页
        2.4.1 引物设计第26-27页
        2.4.2 PCV嵌合株感染性克隆的构建第27-29页
        2.4.3 PCV嵌合感染性克隆的转染第29-31页
        2.4.4 嵌合重组病毒的连续传代第31页
        2.4.5 嵌合重组病毒的PCR检测第31-32页
        2.4.6 间接免疫荧光(IFA)检测第32-33页
        2.4.7 嵌合重组病毒TCID50的测定第33页
        2.4.8 嵌合重组PCV的小鼠接种实验第33-35页
3 结果第35-50页
    3.1 PCV2与TTSUV混合感染的分子流行病学调查分析第35-37页
        3.1.1 PCV2感染的检测结果第35页
        3.1.2 PCV2 ORF2基因的序列同源性分析第35-37页
    3.2 现地PCV2分离株全基因组的克隆与序列分析第37-42页
        3.2.1 现地PCV2分离株的全基因组的扩增、克隆及鉴定第37页
        3.2.2 Cap基因的聚类分析结果第37-39页
        3.2.3 Rep基因的聚类分析结果第39-40页
        3.2.4 AHF13、AHF14和AHF9的全基因组序列分析第40页
        3.2.5 AHF13、AHF14和AHF9的重组分析结果第40-42页
    3.3 PCV嵌合病毒的建立第42-50页
        3.3.1 重组pcDNA-PCV1-2、pcDNA-PCV2-1和pcNA-PCV2的鉴定第42-44页
        3.3.2 感染性嵌合克隆株的RT-PCR检测第44-45页
        3.3.3 嵌合病毒复制动力学的病毒TCID50的测定第45-46页
        3.3.4 嵌合病毒体外稳定性的检测第46-47页
        3.3.5 嵌合病毒体内组织学分布的检测第47-48页
        3.3.6 嵌合病毒体内稳定性的检测第48-49页
        3.3.7 特异性抗体的检测第49-50页
4 讨论第50-53页
    4.1 PCV2感染的调查第50页
    4.2 PCV2的自然重组第50-51页
    4.3 PCV嵌合病毒的建立第51-53页
5 结论第53-54页
致谢第54-55页
参考文献第55-66页
攻读硕士期间发表的学术论文第66页

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