| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-29页 |
| 1.1 川芎简介 | 第14-15页 |
| 1.2 川芎的药理作用 | 第15-19页 |
| 1.2.1 对心血管系统的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.2 对神经系统的作用 | 第16页 |
| 1.2.3 对呼吸系统的作用 | 第16-17页 |
| 1.2.4 对消化系统的作用 | 第17页 |
| 1.2.5 对泌尿系统的作用 | 第17页 |
| 1.2.6 对免疫系统的作用 | 第17-18页 |
| 1.2.7 其他作用 | 第18-19页 |
| 1.3 COMT简介 | 第19-20页 |
| 1.4 固定化方法简介 | 第20-23页 |
| 1.4.1 吸附固定化法 | 第21页 |
| 1.4.2 包埋固定化法 | 第21-22页 |
| 1.4.3 交联固定化法 | 第22页 |
| 1.4.4 共价结合固定化法 | 第22-23页 |
| 1.5 蛋白质结构研究方法简介 | 第23-26页 |
| 1.5.1 X射线单晶衍射技术 | 第23-25页 |
| 1.5.2 核磁共振波谱法 | 第25页 |
| 1.5.3 电镜三维重构技术 | 第25-26页 |
| 1.6 课题的研究内容、意义和技术路线 | 第26-29页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第27页 |
| 1.6.2 本研究的意义 | 第27-28页 |
| 1.6.3 本课题的技术路线 | 第28-29页 |
| 第2章 金属离子对LCCOMT酶活力的影响 | 第29-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.1.1 菌株 | 第29页 |
| 2.1.2 试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 培养基 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 LCCOMT的诱导表达 | 第30页 |
| 2.2.2 LCCOMT的纯化 | 第30页 |
| 2.2.3 LCCOMTSDS-PAGE检测 | 第30-31页 |
| 2.2.4 LCCOMT的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.5 LCCOMT浓度测定 | 第31页 |
| 2.2.6 HPLC测定金属离子对LCCOMT活力的影响 | 第31页 |
| 2.2.7 Cu~(2+)、Zn~(2+)对LCCOMT紫外可见吸收光谱和荧光光谱的影响 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第32-40页 |
| 2.3.1 LCCOMT的表达纯化及SDS-PAGE检测 | 第32-33页 |
| 2.3.2 LCCOMT的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.3 LCCOMT浓度测定 | 第34页 |
| 2.3.4 金属离子对LCCOMT活力的影响 | 第34-38页 |
| 2.3.5 Cu~(2+)、Zn~(2+)对LCCOMT紫外可见吸收光谱和荧光光谱的影响 | 第38-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-42页 |
| 第3章 海藻酸钠固定化LCCOMT的研究 | 第42-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.1.1 菌株 | 第42页 |
| 3.1.2 试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 培养基 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 LCCOMT的表达纯化及SDS-PAGE检测 | 第42页 |
| 3.2.2 LCCOMT浓度测定 | 第42页 |
| 3.2.3 固定化LCCOMT单因素实验 | 第42-43页 |
| 3.2.4 固定化LCCOMT正交试验 | 第43-44页 |
| 3.2.5 游离酶与固定化酶的酶学性质比较 | 第44-45页 |
| 3.2.6 固定化LCCOMT操作稳定性实验 | 第45页 |
| 3.2.7 聚乙二醇4000对固定化LCCOMT活力的影响 | 第45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-56页 |
| 3.3.1 LCCOMT的表达纯化及SDS-PAGE检测 | 第45页 |
| 3.3.2 LCCOMT浓度测定 | 第45-46页 |
| 3.3.3 固定化LCCOMT单因素实验 | 第46-49页 |
| 3.3.4 固定化LCCOMT正交试验结果 | 第49-51页 |
| 3.3.5 游离酶与固定化酶的酶学性质比较 | 第51-54页 |
| 3.3.6 固定化LCCOMT操作稳定性实验 | 第54-55页 |
| 3.3.7 聚乙二醇4000对固定化LCCOMT活力的影响 | 第55-56页 |
| 3.4 本章小结 | 第56-58页 |
| 第4章 LCCOMT的结构生物学研究 | 第58-78页 |
| 4.1 实验材料 | 第58页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第58页 |
| 4.1.2 试剂 | 第58页 |
| 4.1.3 培养基 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-63页 |
| 4.2.1 LCCOMT基因片段的制备 | 第58-59页 |
| 4.2.2 LCCOMT原核表达载体的构建 | 第59-61页 |
| 4.2.3 LCCOMT的诱导表达和纯化 | 第61页 |
| 4.2.4 LCCOMT浓度测定 | 第61页 |
| 4.2.5 LCCOMT活性检测 | 第61-62页 |
| 4.2.6 LCCOMT结晶条件初筛 | 第62页 |
| 4.2.7 LCCOMT结晶条件优化 | 第62-63页 |
| 4.2.8 LCCOMT衍射数据收集 | 第63页 |
| 4.2.9 LCCOMT晶体结构解析 | 第63页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第63-77页 |
| 4.3.1 LCCOMT原核表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.3.2 LCCOMT的诱导表达 | 第64页 |
| 4.3.3 LCCOMT的纯化 | 第64-65页 |
| 4.3.4 LCCOMT活性检测 | 第65-66页 |
| 4.3.5 LCCOMT结晶条件初筛结果 | 第66-68页 |
| 4.3.6 LCCOMT结晶条件优化结果 | 第68-70页 |
| 4.3.7 LCCOMT数据收集和结构解析 | 第70-75页 |
| 4.3.8 His标签对LCCOMT结晶的影响 | 第75-77页 |
| 4.4 本章小结 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-94页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第94页 |
