| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要缩略词表 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-39页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 1.1 PQBP1分子的研究概述 | 第18-29页 |
| 1.1.1 Renpenning综合征与PQBP1基因 | 第18-19页 |
| 1.1.2 PQBP1的发现和蛋白结构 | 第19-23页 |
| 1.1.3 PQBP1的功能研究 | 第23-29页 |
| 1.1.4 PQBP1分子的研究展望 | 第29页 |
| 1.2 FMRP分子的研究概述 | 第29-38页 |
| 1.2.1 脆性X综合征和FMR1基因 | 第29-30页 |
| 1.2.2 FMRP的发现和蛋白结构 | 第30-32页 |
| 1.2.3 FMRP的功能研究 | 第32-35页 |
| 1.2.4 FMRP的翻译后修饰 | 第35-38页 |
| 1.3 本研究拟解决的问题 | 第38-39页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第39-67页 |
| 分子生物学部分 | 第39-54页 |
| 2.1 质粒的构建 | 第39-42页 |
| 2.1.1 PCR酶切法构建质粒 | 第39-41页 |
| 2.1.2 点突变法构建质粒 | 第41-42页 |
| 2.2 RNA的提取、cDNA合成及Real-time RT-PCR | 第42-44页 |
| 2.2.1 RNA的提取 | 第42页 |
| 2.2.2 cDNA合成 | 第42-43页 |
| 2.2.3 Real-time RT-PCR | 第43-44页 |
| 2.3 融合蛋白的表达和纯化 | 第44-46页 |
| 2.3.1 诱导GST融合蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 2.3.2 GST融合蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 2.3.3 诱导MBP融合蛋白的表达 | 第46页 |
| 2.3.4 MBP融合蛋白的纯化 | 第46页 |
| 2.4 GST pull-down检测蛋白间相互作用 | 第46-47页 |
| 2.4.1 融合蛋白浓度的测定 | 第46-47页 |
| 2.4.2 GST pull-down | 第47页 |
| 2.5 抗体的制备 | 第47-49页 |
| 2.6 蛋白提取和Western blotting免疫印迹 | 第49-51页 |
| 2.6.1 细胞总蛋白的提取 | 第49页 |
| 2.6.2 Western blotting免疫印迹 | 第49-51页 |
| 2.7 蛋白间竞争性结合实验 | 第51页 |
| 2.8 RNA结合实验 | 第51-52页 |
| 2.9 泛素化分析 | 第52-54页 |
| 2.9.1 细胞转染后泛素化分析 | 第52-53页 |
| 2.9.2 体外表达蛋白泛素化分析 | 第53-54页 |
| 细胞生物学部分 | 第54-57页 |
| 2.10 细胞培养 | 第54-55页 |
| 2.10.1 SH-SY5Y细胞的培养 | 第54页 |
| 2.10.2 小鼠神经元细胞的原代培养 | 第54-55页 |
| 2.11 细胞转染 | 第55页 |
| 2.12 细胞的多肽处理 | 第55-56页 |
| 2.13 细胞免疫荧光染色 | 第56-57页 |
| 2.14 电生理记录 | 第57页 |
| 果蝇遗传学部分 | 第57-63页 |
| 2.15 果蝇品系 | 第57-58页 |
| 2.16 转基因果蝇的制备 | 第58-59页 |
| 2.17 果蝇的饲养 | 第59页 |
| 2.18 NMJ成像分析 | 第59-60页 |
| 2.18.1 解剖果蝇幼虫 | 第59-60页 |
| 2.18.2 NMJ免疫荧光染色 | 第60页 |
| 2.19 果蝇whole head免疫荧光染色 | 第60-63页 |
| 附表 | 第63-67页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第67-103页 |
| 3.1 PQBP1与FMRP的直接相互作用在物种间高度保守 | 第67-69页 |
| 3.1.1 PQBP1与FMRP存在直接且保守的相互作用 | 第67-68页 |
| 3.1.2 PQBP1通过C末端结构直接结合FMRP | 第68-69页 |
| 3.2 PQBP1-dupAG突变产生的全新C末端基序可直接结合FMRP | 第69-73页 |
| 3.2.1 Renpenning综合征病人中PQBP1移码突变导致氨基酸序列改变 | 第70-71页 |
| 3.2.2 PQBP1-delAGAG和PQBP1-dupAG突变蛋白可结合FMRP | 第71-72页 |
| 3.2.3 PQBP1-dupAG、PQBP1-delAGAG突变蛋白C末端结构具有全新的FMRP结合基序 | 第72-73页 |
| 3.3 PQBP1-dupAG偏好结合非磷酸化状态的FMRP | 第73-78页 |
| 3.3.1 PQBP1-WT和PQBP1-dupAG均结合于FMRP的RGG结构域 | 第74-75页 |
| 3.3.2 PQBP1-WT、PQBP1-dupAG与FMRP的相互作用影响RGG功能 | 第75-76页 |
| 3.3.3 PQBP1-dupAG与FMRP的结合亲和力高于PQBP1-WT | 第76-77页 |
| 3.3.4 PQBP1-dupAG偏好结合非磷酸化的FMRP | 第77-78页 |
| 3.4 PQBP1-dupAG通过泛素降解途径下调FMRP蛋白水平 | 第78-84页 |
| 3.4.1 PQBP1-dupAG下调FMRP的蛋白水平 | 第78-80页 |
| 3.4.2 PQBP1-dupAG的C末端基序直接下调FMRP的蛋白水平 | 第80-82页 |
| 3.4.3 PQBP1-dupAG导致FMRP的多聚泛素化增加 | 第82-84页 |
| 3.5 PQBP1-dupAG可减弱FMRP对MAP1B的翻译抑制作用 | 第84-85页 |
| 3.6 PQBP1-dupAG扰乱海马神经元中FMRP依赖的突触稳态可塑性 | 第85-88页 |
| 3.6.1 PQBP1-dupAG-C多肽持续降低细胞中FMRP的蛋白水平 | 第86-87页 |
| 3.6.2 PQBP1-dupAG-C多肽扰乱神经元中药物诱导的synaptic scaling | 第87-88页 |
| 3.7 果蝇NMJ中表达PQBP1-dupAG导致突触过度生长 | 第88-93页 |
| 3.7.1 PQBP1-WT和PQBP1-dupAG转基因果蝇的获得 | 第88-90页 |
| 3.7.2 PQBP1-dupAG下调果蝇内源dFMRP的蛋白水平 | 第90-91页 |
| 3.7.3 果蝇中PQBP1-dupAG的表达会影响dFMRP依赖的突触生长 | 第91-93页 |
| 3.8 果蝇LNv中表达PQBP1-dupAG导致神经元异常分支 | 第93-94页 |
| 3.9 结论 | 第94-96页 |
| 3.10 讨论 | 第96-103页 |
| 3.10.1 PQBP1移码突变后产生获得性功能进而导致Renpenning综合征的病理机制 | 第96-98页 |
| 3.10.2 PQBP1-dupAG与FMRP共同参与相关疾病的发生过程 | 第98-99页 |
| 3.10.3 研究XLID疾病的相关动物模型 | 第99-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 致谢 | 第115-119页 |
| 作者简介 | 第119-120页 |
