| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 文献综述 | 第14-39页 |
| 第一章 Th17 细胞和乳腺免疫研究进展 | 第14-39页 |
| 1.1 Th17 细胞的发生与分化 | 第14-16页 |
| 1.1.1 Th17 细胞的发现 | 第14-15页 |
| 1.1.2 Th17 细胞的分化 | 第15-16页 |
| 1.2 Th17 细胞与抗感染免疫 | 第16-31页 |
| 1.2.1 IL-17A | 第16-23页 |
| 1.2.2 IL-22 | 第23-28页 |
| 1.2.3 IL-21 | 第28-31页 |
| 1.3 乳房炎研究进展 | 第31-39页 |
| 1.3.1 乳房炎概述 | 第31-32页 |
| 1.3.2 乳腺免疫 | 第32-36页 |
| 1.3.3 乳房炎的损伤机制 | 第36-39页 |
| 试验研究 | 第39-86页 |
| 第二章 奶山羊IL-17、IL-21 和IL-22 的克隆与序列分析 | 第39-56页 |
| 2.1 材料 | 第39-40页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第39页 |
| 2.1.2 菌种和载体 | 第39页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第39页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第39-40页 |
| 2.1.5 主要溶液配方 | 第40页 |
| 2.2 方法 | 第40-45页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第40页 |
| 2.2.2 奶山羊外周血淋巴细胞的分离与刺激活化 | 第40-41页 |
| 2.2.3 淋巴细胞总RNA 提取 | 第41页 |
| 2.2.4 反转录和PCR 扩增 | 第41-42页 |
| 2.2.5 构建克隆载体 | 第42-45页 |
| 2.2.6 目的基因序列分析 | 第45页 |
| 2.3 结果与分析 | 第45-53页 |
| 2.3.1 目的基因RT-PCR 扩增结果 | 第45-46页 |
| 2.3.2 克隆载体鉴定结果 | 第46-47页 |
| 2.3.3 序列分析 | 第47-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-55页 |
| 2.4.1 CaIL-17 的克隆 | 第53-54页 |
| 2.4.2 CaIL-22 的克隆 | 第54页 |
| 2.4.3 CaIL-21 的克隆 | 第54-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 CaIL-17 和CaIL-22 在大肠杆菌中的表达及其多抗制备 | 第56-73页 |
| 3.1 材料 | 第56-59页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第56页 |
| 3.1.2 菌种和载体 | 第56页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第56页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第56页 |
| 3.1.5 主要溶液配方 | 第56-59页 |
| 3.2 方法 | 第59-65页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第59页 |
| 3.2.2 目的片段克隆 | 第59页 |
| 3.2.3 原核表达载体的构建 | 第59-61页 |
| 3.2.4 重组质粒的诱导表达 | 第61页 |
| 3.2.5 诱导表达条件优化 | 第61-62页 |
| 3.2.6 表达产物检测 | 第62-63页 |
| 3.2.7 重组蛋白纯化 | 第63页 |
| 3.2.8 重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第63-65页 |
| 3.3 结果与分析 | 第65-71页 |
| 3.3.1 目的片段的扩增 | 第65页 |
| 3.3.2 重组质粒的鉴定 | 第65-66页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE 电泳 | 第66页 |
| 3.3.4 最佳诱导表达条件的确定 | 第66-68页 |
| 3.3.5 蛋白纯化 | 第68页 |
| 3.3.6 Western blotting | 第68-69页 |
| 3.3.7 多克隆抗体的制备及IgG 粗提 | 第69-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-72页 |
| 3.4.1 目的蛋白的表达 | 第71-72页 |
| 3.4.2 多克隆抗体的制备 | 第72页 |
| 3.5 小结 | 第72-73页 |
| 第四章 奶山羊IL-17、IL-21 和IL-22 在昆虫细胞中的表达 | 第73-86页 |
| 4.1 材料 | 第73-74页 |
| 4.1.1 质粒、菌株和细胞 | 第73页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第73页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第73页 |
| 4.1.4 主要溶液配方 | 第73-74页 |
| 4.2 方法 | 第74-79页 |
| 4.2.1 重组转移载体的构建 | 第74-75页 |
| 4.2.2 重组杆状病毒穿梭载体的构建 | 第75-77页 |
| 4.2.3 重组杆状病毒的获取 | 第77-78页 |
| 4.2.4 重组蛋白的表达 | 第78-79页 |
| 4.2.5 重组蛋白活性检测 | 第79页 |
| 4.3 结果 | 第79-83页 |
| 4.3.1 重组转移载体的鉴定 | 第79-80页 |
| 4.3.2 重组穿梭质粒的鉴定 | 第80-81页 |
| 4.3.3 转染后细胞病变观察 | 第81-82页 |
| 4.3.4 表达产物的WB 分析 | 第82页 |
| 4.3.5 表达产物活性检测 | 第82-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-85页 |
| 4.4.1 重组Bacmid 构建 | 第83-84页 |
| 4.4.2 重组蛋白表达 | 第84页 |
| 4.4.3 重组蛋白活性检测 | 第84-85页 |
| 4.5 小结 | 第85-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-101页 |
| 缩略词 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 作者简介 | 第103页 |
