| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第12-13页 |
| 1.2 猪流感的流行病学特征及其危害 | 第13-16页 |
| 1.2.1 流感病毒的结构特征 | 第13页 |
| 1.2.2 流感病毒的分类 | 第13页 |
| 1.2.3 甲型流感病毒的蛋白种类和功能 | 第13-15页 |
| 1.2.4 流感病毒的生活史与致病机理 | 第15页 |
| 1.2.5 猪流感的危害 | 第15-16页 |
| 1.3 转基因抗病育种研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 抗病育种 | 第16-17页 |
| 1.3.2 转基因技术及其在抗病育种上的应用 | 第17-19页 |
| 1.4 抗病毒天然免疫反应 | 第19-21页 |
| 1.4.1 天然免疫系统的组成和机制 | 第19页 |
| 1.4.2 模式识别受体及其对病毒的识别 | 第19-21页 |
| 1.5 RIG-Ⅰ研究进展 | 第21-24页 |
| 1.5.1 RIG-Ⅰ结构和功能 | 第21-22页 |
| 1.5.2 RIG-Ⅰ与病毒间的互作 | 第22-24页 |
| 1.6 干扰素及其诱导的主要抗病毒蛋白 | 第24-26页 |
| 1.6.1 干扰素 | 第24页 |
| 1.6.2 Mx蛋白 | 第24-25页 |
| 1.6.3 双链RNA依赖性蛋白激酶 | 第25页 |
| 1.6.4 2’-5’寡聚腺苷合成酶 | 第25-26页 |
| 1.7 IRG-6研究进展 | 第26-27页 |
| 2 研究目的与意义 | 第27-28页 |
| 3 材料与方法 | 第28-52页 |
| 3.1 试验材料 | 第28-36页 |
| 3.1.1 细胞和病毒 | 第28页 |
| 3.1.2 载体与菌株 | 第28-32页 |
| 3.1.3 主要试剂与试剂盒 | 第32页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第32-34页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第34页 |
| 3.1.6 分子生物学分析软件 | 第34-35页 |
| 3.1.7 主要数据库和网站 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-52页 |
| 3.2.1 目的基因或片段的克隆 | 第37-39页 |
| 3.2.2 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第39-40页 |
| 3.2.3 PCR产物或酶切产物的回收、纯化与测序 | 第40页 |
| 3.2.4 外源DNA片段与目的载体的连接反应 | 第40-41页 |
| 3.2.5 连接产物的转化 | 第41页 |
| 3.2.6 质粒的制备与鉴定 | 第41-43页 |
| 3.2.7 菌种的保存 | 第43页 |
| 3.2.8 细胞培养与质粒转染(脂质体介导转染法) | 第43-45页 |
| 3.2.9 Western blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第45-46页 |
| 3.2.10 半数细胞培养物感染量(TCID_(50))的测定 | 第46-47页 |
| 3.2.11 细胞的接毒 | 第47页 |
| 3.2.12 细胞、感染病毒的细胞样品总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 3.2.13 cDNA的合成 | 第48页 |
| 3.2.14 实时定量PCR | 第48-52页 |
| 4 结果与分析 | 第52-72页 |
| 4.1 猪RIG-Ⅰ基因的克隆及功能鉴定 | 第52-66页 |
| 4.1.1 猪RIG-Ⅰ基因的克隆 | 第52-53页 |
| 4.1.2 猪RIG-Ⅰ的序列分析 | 第53-54页 |
| 4.1.3 猪RIG-Ⅰ的系统发生树 | 第54-55页 |
| 4.1.4 猪RIG-Ⅰ真核表达载体的构建 | 第55-57页 |
| 4.1.5 超表达猪RIG-Ⅰ对猪流感病毒增殖的影响 | 第57-60页 |
| 4.1.6 猪RIG-Ⅰ诱导激活鸡RLR信号通路及逆转录病毒载体构建 | 第60-66页 |
| 4.2 猪IRG-6基因的克隆及功能鉴定 | 第66-72页 |
| 4.2.1 猪IRG-6基因的克隆 | 第66-67页 |
| 4.2.2 猪IRG-6的序列分析 | 第67-68页 |
| 4.2.3 猪IRG-6的系统发生树 | 第68页 |
| 4.2.4 猪IRG-6真核表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 4.2.5 超表达猪IRG-6对猪流感病毒增殖的影响 | 第69-72页 |
| 5 讨论与小结 | 第72-79页 |
| 5.1 讨论 | 第72-77页 |
| 5.1.1 猪RIG-Ⅰ、IRG-6的克隆和序列分析 | 第72页 |
| 5.1.2 猪RIG-Ⅰ对猪流感病毒增殖的影响 | 第72-74页 |
| 5.1.3 猪RIG-Ⅰ在鸡成纤维细胞中的研究 | 第74-76页 |
| 5.1.4 猪IRG-6对猪流感病毒增殖的影响 | 第76-77页 |
| 5.2 小结 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
