| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·丹参及丹参酮概述 | 第12页 |
| ·丹参酮的药源问题 | 第12页 |
| ·丹参酮药源解决途径 | 第12-17页 |
| ·毛状根培养技术 | 第13页 |
| ·丹参毛状根研究概况 | 第13-16页 |
| ·丹参酮代谢工程 | 第16-17页 |
| ·丹参酮类化合物的生物合成途径及其相关催化酶 | 第17-23页 |
| ·丹参甲羟戊酸(MVA) 途径及相关催化酶 | 第19页 |
| ·丹参1-脱氧-D-木酮糖-5 磷酸(DXP) 途径及相关催化酶 | 第19-21页 |
| ·丹参酮生物合成下游特异途径及相关催化酶 | 第21-23页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·载体及菌种 | 第24页 |
| ·主要设备仪器 | 第24-25页 |
| ·购买的试剂盒、试剂、药品及酶等 | 第25页 |
| ·实验常用试剂 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-39页 |
| ·丹参无菌苗的扩繁 | 第26-27页 |
| ·丹参总RNA 的提取与检测 | 第27-28页 |
| ·准备工作 | 第27页 |
| ·用RNAprep pure Plant kit 抽提丹参总RNA | 第27-28页 |
| ·RNA 纯度与浓度检测 | 第28页 |
| ·丹参SmGGPPS、SmHMGR 基因全长cDNA 的克隆 | 第28-31页 |
| ·3’RACE 模板的合成 | 第28-29页 |
| ·3’端cDNA 片段扩增 | 第29-30页 |
| ·5’RACE 模板的合成 | 第30页 |
| ·5’端cDNA 片段扩增 | 第30-31页 |
| ·扩增SmGGPPS ORF 片段及SmHMGR ORF 片段 | 第31页 |
| ·SmGGPPS ORF 片段及 SmHMGR ORF 片段的回收及其回收产物分别与pMD-18T Vector 连接 | 第31页 |
| ·连接产物分别转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序鉴定 | 第32页 |
| ·丹参SmGGPPS、SmHMGR 的组织表达分析 | 第32-33页 |
| ·RNA 的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32-33页 |
| ·丹参SmGGPPS、SmHMGR 在水杨酸和甲基茉莉酸处理下的表达分析 | 第33-34页 |
| ·丹参SmGGPPS 原核表达 | 第34页 |
| ·颜色互补实验验证丹参SmGGPPS 功能 | 第34-35页 |
| ·不同诱导子对丹参毛状根中丹参酮生物合成相关基因表达和丹参酮积累的影响 | 第35-39页 |
| ·丹参毛状根的悬浮培养 | 第35-36页 |
| ·诱导子的制备 | 第36页 |
| ·丹参酮类成分的提取和HPLC 含量测定 | 第36-37页 |
| ·总RNA 的提取 | 第37页 |
| ·cDNA 的合成和RT-PCR | 第37-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-73页 |
| ·总RNA 的提取 | 第39页 |
| ·丹参SmGGPPS 基因的克隆和序列分析 | 第39-49页 |
| ·SmGGPPS 的克隆 | 第39-40页 |
| ·SmGGPPS 全长DNA 序列的获得 | 第40-42页 |
| ·SmGGPPS 序列的生物信息学分析 | 第42-45页 |
| ·SmGGPPS 在E.coli BL21(DE3)中的异源表达 | 第45-46页 |
| ·在E.coli DH5α中验证SmGGPPS 功能 | 第46-48页 |
| ·SmGGPPS 组织表达谱分析 | 第48页 |
| ·水杨酸和甲基茉莉酸处理下SmGGPPS 表达模式分析 | 第48-49页 |
| ·丹参SmHMGR 基因的克隆和序列分析 | 第49-58页 |
| ·SmHMGR 的克隆 | 第49-52页 |
| ·SmHMGR 序列的生物信息学分析 | 第52-55页 |
| ·SmHMGR 组织表达谱分析 | 第55-56页 |
| ·水杨酸和甲基茉莉酸处理下SmHMGR 表达模式分析 | 第56-58页 |
| ·不同诱导子对丹参毛状根中丹参酮生物合成相关基因表达和丹参酮积累的影响 | 第58-73页 |
| ·高效液相色谱(HPLC) 方法测定丹参酮含量的建立 | 第59-61页 |
| ·不同诱导子对丹参酮(CT+T2A) 合成的影响 | 第61-63页 |
| ·MJ 诱导子对丹参酮生物合成途径的影响 | 第63页 |
| ·Ag~+ 诱导子对丹参酮生物合成途径的影响 | 第63-64页 |
| ·YE 诱导子对丹参酮生物合成途径的影响 | 第64-66页 |
| ·YE 诱导子和Ag~+ 诱导子对丹参酮生物合成途径的组合效应 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第68-73页 |
| ·丹参酮生物合成途径中5 个关键限速酶基因的初步推测 | 第68-69页 |
| ·丹参酮生物合成途径中可能的关键酶基因之一SmHMGR | 第69-70页 |
| ·SmDXS 两个成员可能在丹参初生代谢和次生代谢中扮演不同角色 | 第70页 |
| ·SmDXR 虽然参与丹参酮生物合成，但不一定是提高丹参酮的有效靶点 | 第70-71页 |
| ·SmGGPPS 是丹参酮生物合成途径中的关键酶之一 | 第71-72页 |
| ·SmCPS 应该也是丹参酮生物合成的关键限速酶基因之一 | 第72页 |
| ·丹参SmKSL 在丹参酮生物合成中的作用有待于进一步验证 | 第72-73页 |
| 第四章 总结与展望 | 第73-76页 |
| ·研究结论 | 第73-74页 |
| ·后续研究方向 | 第74-76页 |
| 附录图 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 硕士期间发表的论文及成果 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
