| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 绪论 | 第11页 |
| 1.2 植物耐盐性及抗盐基因功能研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1 盐胁迫对植物的伤害 | 第11-12页 |
| 1.2.2 植物耐盐机理 | 第12-13页 |
| 1.2.3 植物抗盐基因工程研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3 酪氨酸蛋白磷酸酶的研究概述 | 第15-18页 |
| 1.3.1 PTP的结构与分类 | 第16页 |
| 1.3.2 PTP的研究现状 | 第16-18页 |
| 1.3.3 PTP与逆境胁迫 | 第18页 |
| 1.4 病毒诱导的基因沉默技术 | 第18-20页 |
| 1.4.1 VIGS的分子机制 | 第19-20页 |
| 1.4.2 VIGS技术的优越性与局限性 | 第20页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 水培条件下棉花VIGS体系的建立及优化 | 第22-34页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 试验材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 植物材料及培养条件 | 第22-23页 |
| 2.2.2 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.2.4 常用试剂 | 第24页 |
| 2.3 试验方法 | 第24-28页 |
| 2.3.1 A.tumefaciens GV3101感受态细胞的制备及转化 | 第24页 |
| 2.3.2 棉花水培种植 | 第24-25页 |
| 2.3.3 农杆菌介导的VIGS基因沉默 | 第25页 |
| 2.3.4 实验条件设计 | 第25页 |
| 2.3.5 棉花总RNA的提取及反转录 | 第25-26页 |
| 2.3.6 GhCLAl沉默效率检测 | 第26页 |
| 2.3.7 叶绿素含量的测定 | 第26-27页 |
| 2.3.8 GhCTRl载体构建及基因沉默 | 第27页 |
| 2.3.9 产物胶回收步骤 | 第27页 |
| 2.3.10 数据统计 | 第27-28页 |
| 2.4 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.4.1 培养温度及菌体浓度对VIGS沉默效率的影响 | 第28页 |
| 2.4.2 不同注射时间对VIGS沉默效率的影响 | 第28-29页 |
| 2.4.3 VIGS对照载体的比较 | 第29-30页 |
| 2.4.4 VIGS-GhCLAl在棉花土培与水培方式上的比较 | 第30页 |
| 2.4.5 VIGS-GhCLAl在棉花不同品种上的沉默表型 | 第30-31页 |
| 2.4.6 TRV诱导的水培棉花GhCTR1基因沉默 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32页 |
| 2.6 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 棉花GhPTP1基因的获得及分子功能研究 | 第34-64页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 试验材料 | 第34-37页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第34-35页 |
| 3.2.2 菌株、质粒和引物 | 第35-36页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第36页 |
| 3.2.4 试验仪器 | 第36-37页 |
| 3.3 试验方法 | 第37-41页 |
| 3.3.1 VIGS-cDNA文库转化 | 第37页 |
| 3.3.2 VIGS-cDNA文库盐相关基因筛选浓度的设定 | 第37页 |
| 3.3.3 VIGS-cDNA文库盐相关基因的筛选 | 第37页 |
| 3.3.4 农杆菌质粒提取 | 第37-38页 |
| 3.3.5 棉花GhPTP1基因的克隆 | 第38页 |
| 3.3.6 GhPTP1的同源比对分析及生物进化树的构建 | 第38页 |
| 3.3.7 相关载体构建 | 第38页 |
| 3.3.8 拟南芥种子消毒 | 第38页 |
| 3.3.9 转基因侵染拟南芥 | 第38-39页 |
| 3.3.10 GhPTP1亚细胞定位 | 第39页 |
| 3.3.11 转GhPTP1基因拟南芥盐胁迫处理 | 第39-40页 |
| 3.3.12 荧光定量PCR测定基因表达 | 第40页 |
| 3.3.13 农杆菌介导的VIGS基因沉默 | 第40页 |
| 3.3.14 根系扫描 | 第40页 |
| 3.3.15 K~+、Na~+离子含量的测定 | 第40页 |
| 3.3.16 失水率的测定 | 第40页 |
| 3.3.17 相对含水量测定 | 第40-41页 |
| 3.4 结果与分析 | 第41-60页 |
| 3.4.1 VIGS-cDNA文库筛选浓度的确定 | 第41页 |
| 3.4.2 V1GS-cDNA文库盐相关基因筛选 | 第41-43页 |
| 3.4.3 GhPTP1基因的克隆 | 第43-44页 |
| 3.4.4 GhPTPl的同源比对分析及生物进化树的构建 | 第44-47页 |
| 3.4.5 棉花GhPTP1蛋白疏水性分析 | 第47-48页 |
| 3.4.6 GhPTP1的亚细胞定位及组织特异性表达 | 第48-49页 |
| 3.4.7 GhPTP1基因对盐胁迫响应机制 | 第49-50页 |
| 3.4.8 GhPTP1基因在其他逆境条件下响应机制 | 第50-51页 |
| 3.4.9 沉默GhPTP1基因对盐胁迫下棉花植株生长的影响 | 第51-53页 |
| 3.4.10 沉默GhPTP1基因对盐胁迫下棉花Na~+、K~+含量的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.11 沉默GhPTP1基因不同功能区在盐胁迫下表型分析 | 第54页 |
| 3.4.12 盐胁迫诱导VIGS-GhPTP1植株盐相关基因的表达 | 第54-55页 |
| 3.4.13 盐胁迫下GhPTP1转基因拟南芥功能验证 | 第55-58页 |
| 3.4.14 GhPTP1在渗透胁迫下功能分析 | 第58-60页 |
| 3.5 小结 | 第60页 |
| 3.6 讨论 | 第60-64页 |
| 第四章 GhPTP1互作蛋白的筛选及验证 | 第64-75页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 试验材料 | 第64-66页 |
| 4.2.1 材料 | 第64页 |
| 4.2.2 菌株、质粒和引物 | 第64-65页 |
| 4.2.3 主要溶液及培养基 | 第65-66页 |
| 4.3 试验方法 | 第66-69页 |
| 4.3.1 载体构建 | 第66页 |
| 4.3.2 酵母感受态的制备 | 第66-67页 |
| 4.3.3 酵母转化 | 第67页 |
| 4.3.4 酵母双杂交文库的筛选 | 第67页 |
| 4.3.5 酵母质粒的提取 | 第67-68页 |
| 4.3.6 棉花原生质体的分离及转化 | 第68页 |
| 4.3.7 免疫共沉淀Co-IP检测GhPTP1与GhANN5间的相互作用 | 第68页 |
| 4.3.8 Western蛋白检测 | 第68-69页 |
| 4.3.9 GhPTP1和GhANN5烟草中瞬时表达 | 第69页 |
| 4.3.10 序列比对 | 第69页 |
| 4.4 结果与分析 | 第69-73页 |
| 4.4.1 诱饵载体pGBK-GhPTPl的构建 | 第69-70页 |
| 4.4.2 酵母双杂交文库的筛选 | 第70-71页 |
| 4.4.3 阳性克隆序列比对分析 | 第71-72页 |
| 4.4.4 GhPTP1与GhANN5的互作关系验证 | 第72-73页 |
| 4.4.5 免疫共沉淀Co-IP检测GhPTP1与GhANN5间的相互作用 | 第73页 |
| 4.4.6 GhPTP1与GhANN5在烟草中瞬时表达 | 第73页 |
| 4.5 小结 | 第73-74页 |
| 4.6 讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 5.1 结论 | 第75页 |
| 5.1.1 水培条件下病毒诱导棉花基因沉默体系的建立及优化 | 第75页 |
| 5.1.2 GhPTP1基因在盐响应信号途径中具有负调控作用 | 第75页 |
| 5.1.3 GhPTP1可与GhANN5互作调节植物抗盐性 | 第75页 |
| 5.2 展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 作者简介 | 第88页 |
