| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1.1 大麦黄矮病毒研究进展 | 第14-23页 |
| 1.1.1 分类地位 | 第14-15页 |
| 1.1.2 生物学特性 | 第15-17页 |
| 1.1.2.1 粒子形态与寄主范围 | 第15页 |
| 1.1.2.2 病害症状 | 第15-16页 |
| 1.1.2.3 传播方式 | 第16-17页 |
| 1.1.2.4 病害循环 | 第17页 |
| 1.1.3 基因组结构及基因功能 | 第17-20页 |
| 1.1.3.1 基因组结构 | 第17页 |
| 1.1.3.2 复制蛋白 | 第17-18页 |
| 1.1.3.3 结构蛋白 | 第18-19页 |
| 1.1.3.4 运动蛋白 | 第19页 |
| 1.1.3.5 蛋白P6 | 第19-20页 |
| 1.1.3.6 蛋白P3a | 第20页 |
| 1.1.4 基因表达与调控 | 第20-23页 |
| 1.1.4.1 亚基因组的合成与调控 | 第20-22页 |
| 1.1.4.2 不依赖 5’帽子的翻译 | 第22页 |
| 1.1.4.3 移码翻译 | 第22页 |
| 1.1.4.4 通读翻译 | 第22-23页 |
| 1.1.4.5 渗漏扫描 | 第23页 |
| 1.2 抗黄矮病育种研究进展 | 第23-28页 |
| 1.2.1 小麦黄矮病防治策略 | 第23页 |
| 1.2.2 BYDVs的自然抗源 | 第23-25页 |
| 1.2.2.1 小麦、大麦和燕麦中耐BYDVs种质资源 | 第23-24页 |
| 1.2.2.2 小麦近缘物种中抗BYDVs种质资源 | 第24-25页 |
| 1.2.3 BYDVs的转基因抗性 | 第25-26页 |
| 1.2.4 小麦抗黄矮病性鉴定方法 | 第26-28页 |
| 1.2.4.1 田间抗病性鉴定方法 | 第26页 |
| 1.2.4.2 室内抗病性鉴定方法 | 第26-27页 |
| 1.2.4.3 抗病基因鉴定方法 | 第27-28页 |
| 1.3 植物病毒侵染性克隆 | 第28-33页 |
| 1.3.1 植物病毒侵染性克隆的种类 | 第28-29页 |
| 1.3.1.1 侵染性体外转录物 | 第28-29页 |
| 1.3.1.2 侵染性cDNA克隆 | 第29页 |
| 1.3.2 影响侵染性克隆活性的因素 | 第29-31页 |
| 1.3.2.1 碱基突变对侵染活性的影响 | 第29-30页 |
| 1.3.2.2 基因组末端结构对侵染活性的影响 | 第30-31页 |
| 1.3.2.3 接种方法对侵染活性的影响 | 第31页 |
| 1.3.3 植物病毒侵染性克隆的应用 | 第31-33页 |
| 1.3.3.1 研究病毒基因功能 | 第31-32页 |
| 1.3.3.2 构建植物表达载体 | 第32页 |
| 1.3.3.3 构建基因沉默载体 | 第32-33页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 华山新麦草及小麦-华山新麦草衍生系对BYDV-GAV抗性研究 | 第34-51页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第35页 |
| 2.1.1 材料 | 第35页 |
| 2.1.1.1 植物材料 | 第35页 |
| 2.1.1.2 病毒毒源 | 第35页 |
| 2.1.1.3 介体昆虫 | 第35页 |
| 2.1.2 试剂 | 第35页 |
| 2.2 试验方法 | 第35-40页 |
| 2.2.1 华山新麦草室内抗病虫性鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.1.1 华山新麦草抗BYDV-GAV鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.1.2 回传试验 | 第36页 |
| 2.2.1.3 华山新麦草抗麦二叉蚜鉴定 | 第36页 |
| 2.2.2 小麦-华山新麦草衍生系室内抗BYDV-GAV鉴定 | 第36页 |
| 2.2.3 小麦-华山新麦草衍生系田间抗BYDV-GAV鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.3.1 田间种植 | 第36页 |
| 2.2.3.2 病毒接种 | 第36-37页 |
| 2.2.3.3 发病调查 | 第37页 |
| 2.2.4 RT-PCR法检测BYDV-GAV | 第37-40页 |
| 2.2.4.1 植物总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.4.2 反转录 | 第38-39页 |
| 2.2.4.3 PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.2.5 TAS-ELISA法检测BYDV-GAV含量 | 第40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-48页 |
| 2.3.1 华山新麦草室内抗病虫性鉴定 | 第40-43页 |
| 2.3.2 小麦-华山新麦草衍生系室内抗BYDV-GAV鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.3 小麦-华山新麦草衍生系田间抗BYDV-GAV鉴定 | 第44-48页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第48-51页 |
| 2.4.1 本章结论 | 第48页 |
| 2.4.2 讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 BYDV-GAV基因组扩增及遗传多样性研究 | 第51-70页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第51-52页 |
| 3.1.1 材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1.1 毒源材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1.2 菌株 | 第52页 |
| 3.1.2 试剂 | 第52页 |
| 3.2 试验方法 | 第52-59页 |
| 3.2.1 BYDV-GAV基因组近等全长扩增与测序 | 第52-56页 |
| 3.2.1.1 引物设计 | 第52页 |
| 3.2.1.2 RT-PCR法分段扩增BYDV-GAV基因组 | 第52-54页 |
| 3.2.1.3 琼脂糖凝胶回收目标DNA片段 | 第54页 |
| 3.2.1.4 TA连接 | 第54页 |
| 3.2.1.5 大肠杆菌热激感受态的制备 | 第54-55页 |
| 3.2.1.6 重组载体的转化和筛选 | 第55页 |
| 3.2.1.7 质粒提取 | 第55-56页 |
| 3.2.1.8 序列测定 | 第56页 |
| 3.2.2 BYDV-GAV基因组末端序列扩增与测序 | 第56-58页 |
| 3.2.2.1 RACE法扩增BYDV-GAV基因组末端序列 | 第56-58页 |
| 3.2.2.2 RACE扩增片段的克隆与测序 | 第58页 |
| 3.2.3 BYDV-GAV基因组拼接与分析 | 第58-59页 |
| 3.2.3.1 基因组拼接 | 第58页 |
| 3.2.3.2 多重比对 | 第58页 |
| 3.2.3.3 序列一致性分析 | 第58页 |
| 3.2.3.4 系统发育分析 | 第58页 |
| 3.2.3.5 选择压力分析 | 第58页 |
| 3.2.3.6 重组分析 | 第58-59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 3.3.1 BYDV-GAV基因组扩增与测序 | 第59-60页 |
| 3.3.2 BYDV-GAV全基因组序列分析 | 第60-67页 |
| 3.3.2.1 序列信息收集 | 第60-61页 |
| 3.3.2.2 序列一致性分析 | 第61-62页 |
| 3.3.2.3 系统发育分析 | 第62-65页 |
| 3.3.2.4 选择压力分析 | 第65页 |
| 3.3.2.5 重组分析 | 第65-67页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第67-70页 |
| 3.4.1 本章结论 | 第67页 |
| 3.4.2 讨论 | 第67-70页 |
| 第四章 BYDV-GAV侵染性cDNA克隆的构建 | 第70-95页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第70-72页 |
| 4.1.1 材料 | 第70-71页 |
| 4.1.1.1 植物材料 | 第70页 |
| 4.1.1.2 介体昆虫 | 第70-71页 |
| 4.1.1.3 载体与菌株 | 第71页 |
| 4.1.2 试剂 | 第71页 |
| 4.1.3 引物 | 第71-72页 |
| 4.2 试验方法 | 第72-83页 |
| 4.2.1 载体构建 | 第72-78页 |
| 4.2.1.1 重叠延伸PCR扩增BYDV-GAV全长cDNA | 第72-73页 |
| 4.2.1.2 pCass-GAV载体构建 | 第73-74页 |
| 4.2.1.3 pCass-GAV-RZ载体构建 | 第74-75页 |
| 4.2.1.4 pCass-HH-G-RZ载体构建 | 第75页 |
| 4.2.1.5 pTCK-GAV-RZ载体构建 | 第75-76页 |
| 4.2.1.6 pRSS-GAV-RZ载体构建 | 第76-78页 |
| 4.2.2 农杆菌接种 | 第78-80页 |
| 4.2.2.1 农杆菌冷激感受态的制备 | 第78页 |
| 4.2.2.2 农杆菌冷激转化与筛选 | 第78-79页 |
| 4.2.2.3 农杆菌浸润接种 | 第79页 |
| 4.2.2.4 农杆菌真空渗透接种 | 第79-80页 |
| 4.2.2.5 农杆菌针刺接种 | 第80页 |
| 4.2.3 基因枪接种 | 第80-81页 |
| 4.2.3.1 微弹制备 | 第80-81页 |
| 4.2.3.2 基因枪轰击 | 第81页 |
| 4.2.4 接种活性检测 | 第81-83页 |
| 4.2.4.1 病毒RNA转录情况检测 | 第81-82页 |
| 4.2.4.2 病毒复制情况检测 | 第82-83页 |
| 4.2.4.3 病毒蛋白表达情况检测 | 第83页 |
| 4.2.4.4 病毒系统运动情况检测 | 第83页 |
| 4.3 结果与分析 | 第83-92页 |
| 4.3.1 BYDV-GAV全长cDNA扩增 | 第83-84页 |
| 4.3.2 BYDV-GAV侵染性克隆载体构建与验证 | 第84-86页 |
| 4.3.2.1 用于双子叶植物接种的BYDV-GAV侵染性克隆载体 | 第84-86页 |
| 4.3.2.2 用于单子叶植物接种的BYDV-GAV侵染性克隆载体 | 第86页 |
| 4.3.3 BYDV-GAV侵染性克隆在双子叶植物中的侵染活性 | 第86-89页 |
| 4.3.3.1 本氏烟中病毒基因组 RNA 的转录 | 第86-87页 |
| 4.3.3.2 本氏烟中病毒基因组RNA的复制和蛋白表达 | 第87-89页 |
| 4.3.3.3 本氏烟中病毒的系统运动和症状表现 | 第89页 |
| 4.3.4 BYDV-GAV侵染性克隆在单子叶植物中的侵染活性 | 第89-92页 |
| 4.3.4.1 接种不同单子叶寄主的侵染活性 | 第89-91页 |
| 4.3.4.2 不同农杆菌菌株对侵染活性的影响 | 第91页 |
| 4.3.4.3 不同启动子对侵染活性的影响 | 第91页 |
| 4.3.4.4 不同接种方式对侵染活性的影响 | 第91-92页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第92-95页 |
| 4.4.1 本章结论 | 第92-93页 |
| 4.4.2 讨论 | 第93-95页 |
| 第五章 全文结论与创新点 | 第95-97页 |
| 5.1 全文结论 | 第95-96页 |
| 5.2 创新点 | 第96页 |
| 5.3 展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-109页 |
| 附录：培养基及缓冲液配方 | 第109-111页 |
| 缩略词 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 作者简介 | 第114页 |
