| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-33页 |
| 1.1 前体mRNA剪切与拼接 | 第12-23页 |
| 1.1.1 前体mRNA剪接简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 前体mRNA的剪切过程 | 第13-15页 |
| 1.1.3 剪接体中的蛋白 | 第15-18页 |
| 1.1.4 可变剪切 | 第18-21页 |
| 1.1.5 mRNA剪接与人类疾病 | 第21-23页 |
| 1.2 禾谷镰刀菌 | 第23-26页 |
| 1.2.1 禾谷镰刀菌的生物学特征 | 第23-24页 |
| 1.2.2 禾谷镰刀菌的生活史 | 第24-25页 |
| 1.2.3 禾谷镰刀菌的毒素 | 第25页 |
| 1.2.4 禾谷镰刀菌与蛋白激酶 | 第25-26页 |
| 1.3 Prp4蛋白激酶研究进展 | 第26-31页 |
| 1.3.1 Prp4蛋白激酶的发现 | 第26-27页 |
| 1.3.2 Prp4蛋白激酶的底物 | 第27-29页 |
| 1.3.3 Prp4在mRNA剪接中的作用 | 第29-30页 |
| 1.3.4 禾谷镰刀菌中Prp4的研究进展 | 第30-31页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 Prp4的预测与进化分析 | 第33-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33页 |
| 2.1.1 Prp4蛋白激酶的进化分析 | 第33页 |
| 2.1.2 Prp4的结构和功能分析 | 第33页 |
| 2.1.3 Prp4的表达和可变剪切分析 | 第33页 |
| 2.2 结果 | 第33-37页 |
| 2.2.1 禾谷镰刀菌Prp4的进化分析 | 第33-34页 |
| 2.2.2 禾谷镰刀菌Prp4的结构和功能分析 | 第34-37页 |
| 2.2.3 Prp4的可变剪切分析 | 第37页 |
| 2.3 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 Prp4对前体mRNA剪切的调控 | 第39-45页 |
| 3.1 材料和方法 | 第39-40页 |
| 3.1.1 RNA的提取 | 第39页 |
| 3.1.2 RNA纯化 | 第39-40页 |
| 3.1.3 cDNA的制备 | 第40页 |
| 3.1.4 RNA-seq测序及数据分析 | 第40页 |
| 3.1.5 RT-PCR验证 | 第40页 |
| 3.2 实验结果 | 第40-44页 |
| 3.2.1 Prp4蛋白激酶影响内含子剪切效率 | 第40-41页 |
| 3.2.2 Prp4影响DNA重组和修复 | 第41-42页 |
| 3.2.3 受到Prp4蛋白激酶影响的内含子的序列特点 | 第42-44页 |
| 3.3 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 Prp4N端区域的作用 | 第45-55页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-51页 |
| 4.1.1 Prp4N端区域的功能分析 | 第45-48页 |
| 4.1.2 免疫亲和沉淀法寻找Prp4蛋白激酶N端区域的磷酸化位点 | 第48-51页 |
| 4.1.3 Prp4中N端S289磷酸化位点功能分析 | 第51页 |
| 4.2 结果 | 第51-53页 |
| 4.2.1 Prp4~(△1-310)、Prp4~(S289A)和Prp4-3xFlag载体的获得 | 第51页 |
| 4.2.2 Prp4N端区域影响蛋白的定位和功能 | 第51-52页 |
| 4.2.3 Prp4的N端区域磷酸化位点的确定与分析 | 第52-53页 |
| 4.3 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 PRP4突变体的自发抑制突变 | 第55-70页 |
| 5.1 材料与方法 | 第55-59页 |
| 5.1.1 角变子的表型分析 | 第55-56页 |
| 5.1.2 候选基因的测序分析 | 第56-57页 |
| 5.1.3 突变位点的序列分析 | 第57页 |
| 5.1.4 突变位点对三维结构的影响分析 | 第57页 |
| 5.1.5 Prp31的人工突变验证 | 第57-59页 |
| 5.2 结果 | 第59-67页 |
| 5.2.1 角变子的分类 | 第59页 |
| 5.2.2 角变子的表型 | 第59-62页 |
| 5.2.3 U4/U6-U5三联体蛋白抑制突变位点的确定 | 第62-64页 |
| 5.2.4 Prp31中点突变分析以及人工突变验证 | 第64-65页 |
| 5.2.5 Prp6中点突变分析 | 第65页 |
| 5.2.6 Prp8和Brr2中点突变的分析 | 第65-67页 |
| 5.2.7 角变子S2和S47剪切效率恢复验证 | 第67页 |
| 5.3 讨论 | 第67-70页 |
| 第六章 Prp4调控Prp31的自抑制以及与三联体蛋白的互作 | 第70-85页 |
| 6.1 材料和方法 | 第70-73页 |
| 6.1.1 Prp31中突变位点进一步鉴定 | 第70页 |
| 6.1.2 Prp4磷酸化Prp31验证 | 第70页 |
| 6.1.3 Prp31的Pull-down实验。 | 第70页 |
| 6.1.4 酵母双杂交 | 第70-72页 |
| 6.1.5 免疫共沉淀（Co-IP） | 第72页 |
| 6.1.6 双分子荧光（BiFC） | 第72页 |
| 6.1.7 Prp31保守磷酸化位点突变分析 | 第72-73页 |
| 6.2 结果 | 第73-83页 |
| 6.2.1 Prp31中突变位点的进一步鉴定 | 第73-74页 |
| 6.2.2 Prp31能够被Prp4磷酸化 | 第74-75页 |
| 6.2.3 Prp31磷酸化位点突变分析 | 第75-77页 |
| 6.2.4 Prp31的C端尾巴能够对自身进行自抑制作用 | 第77-79页 |
| 6.2.5 Prp31 N端区域(75-225氨基酸)参与和C端尾巴的互作 | 第79页 |
| 6.2.6 Prp31与其他蛋白的互作 | 第79-83页 |
| 6.3 讨论 | 第83-85页 |
| 第七章 总结和展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 附录 | 第93-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简介 | 第104页 |
